C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2317695
The invention provides a method and materials for monitoring and isolating differentially expressed genes. In accordance with the method of the invention, differently labeled populations of DNAs from sources to be compared are competitively hybridized with reference DNA cloned on solid phase supports, e.g. microparticles, to provide a differential expression library which, in the preferred embodiment, may be manipulated by fluorescence- activated cell sorting (FACS). Monitoring the relative signal intensity of the different fluorescent labels on the microparticles permits quantitative analysis of expression levels relative to the reference DNA. The invention also provides a method for identifying and isolating rare genes. Populations of microparticles having relative signal intensities of interest can be isolated by FACS and the attached DNAs identified by sequencing, such as with massively parallel signature sequencing (MPSS), or with conventional DNA sequencing protocols.
L'invention porte sur un procédé et des matériaux permettant d'observer et d'isoler des gènes exprimés différentiellement. Selon ledit procédé des populations d'ADN différemment marquées de sources à comparer sont hybridées comparativement, les ADN de référence étant clonés sur des supports en phase solide, par exemple des microparticules, de manière à obtenir une bibliothèque exprimée différentiellement qui dans l'exécution préférée peut être manipulée par "tri de cellules par fluorescence" (FACS). L'observation de l'intensité relative des signaux des différents marqueurs fluorescents des microparticules permet l'analyse quantitative des niveaux d'expression relatifs aux ADN de référence. L'invention porte également sur un procédé d'identification et d'isolement de gènes rares. Les populations de microparticules présentant des signaux d'intensité relative d'intérêt peuvent être isolés par le FACS, tandis que les ADN liés, peuvent être identifiés par séquençage, par exemple par "séquençage à signature massivement parallèle" (MPSS), ou par des protocoles usuels à séquençage d'ADN.
Albrecht Glen
Brenner Sydney
Dubridge Robert
Gowling Lafleur Henderson Llp
Lynx Therapeutics Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1654804