Solid phase sequencing of biopolymers

Details Solid phase sequencing of biopolymers Solid phase sequencing of biopolymers

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) H01J 49/26 (2006.01)

Patent

CA 2218188

This invention relates to methods for detecting and sequencing target nucleic acid sequences, and double-stranded nucleic acid sequences, to nucleic acid probes, to mass modified nucleic acid probes, to arrays of probes useful in these methods and to kits and systems which contain these probes. Useful methods involve hybridizing the nucleic acids or nucleic acids which represent complementary or homologous sequences of the target to an array of nucleic acid probes. These probes comprise a single-stranded portion, an optional double-stranded portion and a variable sequence within the single-stranded portion. The molecular weights of the hybridized nucleic acids of the set can be determined by mass spectroscopy, and the sequence of the target determined from the molecular weights of the fragments. Nucleic acids whose sequences can be determined include DNA or RNA in biological samples such as patient biopsies and environmental samples. Probes may be fixed to a solid support such as a hybridization chip to facilitate automated molecular weight analysis and identification of the target sequence.

L'invention porte sur des procédés de détection et de séquençage de séquences d'acides nucléiques cibles et de séquences d'acides nucléiques double brin, sur des sondes d'acide nucléique, sur des sondes d'acide nucléique modifiées en masse, sur des groupes de sondes intervenant dans des procédés, et sur des trousses et systèmes contenant lesdites sondes. Les procédés efficaces consistent à hybrider les acides nucléiques ou ceux qui représentent des séquences complémentaires ou homologues de la cible à un groupe de sondes d'acide nucléique lesquelles comportent une portion monobrin, une portion facultative double-brin et une séquence variable intérieure à la portion monobrin. Les poids moléculaires des acides nucléiques hybridés de l'ensemble peuvent être déterminés par spectrométrie de masse et la séquence de la cible, peut l'être en fonction du poids moléculaire des fragments. Les acides nucléiques dont les séquences peuvent être déterminées comportent des ADN et des ARN sous forme d'échantillons biologiques, tels que des biopsies prélevées sur des patients ou des échantillons prélevés dans l'environnement. Les sondes peuvent être fixées à un support solide du type pastille d'hybridation pour faciliter la mesure des poids moléculaires et l'identification de la séquence de la cible.

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