Solubility reporter gene constructs

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 5/10 (2006.01) C07K 14/245 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C12Q 1/06 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/551 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)

Patent

CA 2428248

The present invention provides polynucleotides that a protein solubility response promoter operatively liked to a reporter gene and a genetic reporter system comprising these polynucleotides together with an expression construct for a target protein. The invention also provides cells comprising polynucleotides of the invention and the genetic reporter system. These compositions are useful to monitor the solubility of a target protein in a cell and to identify mutations to the cell or mutations to a polynucleotide encoding the target protein that alters the solubility of the target protein. The invention further provides method to identify variations in a protein biosynthetic process that alter the solubility of a target protein and methods to screen an expression library of recombinant clones to identify clones that express soluble proteins. Finally, the invention discloses a novel method of identifying an antibiotic agent.

La présente invention concerne des polynucléotides comportant un promoteur de solubilité des protéines lié en fonctionnement à un gène rapporteur et un système de rapporteur génétique comprenant ces polynucléotides ainsi qu'une construction d'expression pour une protéine cible. L'invention concerne des cellules comportant des polynucléotides de l'invention et le système de rapporteur génétique. Ces compositions sont utiles pour contrôler la solubilité d'une protéine cible dans une cellule et pour identifier des mutations à la cellule ou des mutations au polynucléotide codant pour la protéine cible qui modifie la solubilité de la protéine cible. L'invention concerne en outre un procédé permettant l'identification de variations dans un processus de biosynthèse de protéines qui modifient la solubilité d'une protéine cible et des procédés de criblage d'une bibliothèque d'expression de clones recombinants pour identifier les clones qui expriment les protéines solubles. Enfin, l'invention concerne un nouveau procédé d'identification d'un agent antibiotique. Fig. 1 : a gènes de choc thermique B CONSENSUS C GENES SUPPLEMENTAIRES INDUITS PAR LE MAUVAIS REPLIEMENT TRADUCTIONNEL

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