C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/57 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01)
Patent
CA 2264487
The present invention relates to serine protease NS3 of hepatitis C virus, and in particular to the observation that the NS3 serine protease domain, in its native conformation, binds a Zn2+ ion and that bivalent metallic ions are necessary to the structural integrity of the protein and to the activity of the enzyme. The present invention further relates to recombinant polypeptides which comprise sequences of the NS3 protease and are characterised by a tail of at least three lysines at their C-terminal ends, to increase its solubility. A further subject of the present invention is a new process which allows the expression of said polypeptides, as metalloproteins, with the proteolytic activity of the HCV NS3 protease, in a soluble form and in a quantity sufficient to allow research to identify inhibitors and to determine the three-dimensional structure of the NS3 protease. Figure 4 shows the effects of the zinc ion on the production of the HCV NS3 protease as a soluble protein in E. Coli in a minimum culture medium.
La présente invention concerne la sérine protéase NS3 du virus de l'hépatite C et notamment l'observation que le domaine de la sérine protéase NS3, dans sa conformation native, lie un ion Zn?2+¿ et que des ions métalliques bivalents sont nécessaires à l'intégrité structurelle de la protéine et à l'activité de l'enzyme. La présente invention concerne également des polypeptides recombinés comprenant des séquences de la protéase SN3 et caractérisés par une queue d'au moins trois lysines à leur extrémité C-terminale afin d'en augmenter la solubilité. Un autre sujet de l'invention àtrait à un nouveau procédé permettant l'expression desdits polypeptides, sous la forme de métalloprotéines, avec l'activité protéolyptique de la protéase SN3 du virus de l'hépatite C en une forme soluble et en une quantité suffisante pour permettre de rechercher à identifier des inhibiteurs et déterminer la structure tridimensionnelle de la protéase SN3. La figure 4 illustre les effets de l'ion zinc sur la production de la protéase SN3 du virus de l'hépatite C en tant que protéine soluble dans E.Coli dans un milieu de culture minimum.
Colloca Stefano
de Francesco Raffaele
Nardi Maria Chiara
Steinkuhler Christian
Tomei Licia
Fetherstonhaugh & Co.
Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.a.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1605129