Soluble rna polymerase protein and methods for the use thereof

Details Soluble rna polymerase protein and methods for the use thereof Soluble rna polymerase protein and methods for the use thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/54 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2503307

A polymerase protein originating from a eukaryotic cell and involved in the RNA silencing pathway is for the first time provided in a purified soluble form that possesses a detectable RNA polymerization activity. This polymerase is useful in methods and kits for in vitro RNA synthesis. A polymerase of the invention copies ssRNA templates to produce two types of reaction products: short and long RNA copies. It can also copy ssDNA templates. The polymerization does not require a primer for the initiation of RNA synthesis, although RNA synthesis can be also initiated in the presence of a primer. In addition to standard nucleotides polymerase of this invention also accepts a number of modified nucleotides. The polymerase is useful in many downstream applications such as production of labeled RNA probes or generation of trigger RNA molecules to induce RNA interference effects in living cells or suitable in vitro systems.

L'invention concerne une protéine polymérase provenant d'une cellule eucaryote, impliquée dans la voie de mise sous silence de l'ARN et étant, pour la première fois, fournie sous une forme purifiée soluble possédant une activité de polymérisation détectable. Cette polymérase est utile dans des procédés et des kits de synthèse de l'ARN <i>in vitro</i>. Une polymérase selon l'invention copie des matrices d'ARNss, de manière à produire deux types de produits de réaction: des copies d'ARN courtes et longues. Elle peut également copier des matrices d'ADNss. La polymérisation ne nécessite pas d'amorce pour l'initiation de la synthèse de l'ARN, même si celle-ci peut être également initiée en présence d'une amorce. En plus de la polymérase de nucléotides normalisés selon l'invention, un certain nombre de nucléotides modifiés sont également acceptés. La polymérase est utile dans plusieurs applications aval, telles que la production de sondes d'ARN étiquetées ou la génération de molécules d'ARN déclencheuses, de manière à induire des effets d'interférence d'ARN dans des cellules vivantes ou des systèmes <i>in vitro</i> appropriés.

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