C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/52 (2006.01) C07H 5/10 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01)
Patent
CA 2625999
A method for determining substrates specific for a transferase enzyme selected from glycosyltransferases and sulfotransferases The method includes the steps of a) selecting a substrate to be tested for specificity for sulfotransferases and for glycosyltransferases, fro some specific tn, tetra or penta saccharide compounds b) combining the substrate with glycosyltransferase or sulfo- transferase and donor compound c) incubating the incubation mixtures at a temperature of from 18 to 40 degrees Celcius and pH of 6 to 7 for from 30 minutes to four hours, d) testing the reaction product to determine effectiveness of transferring the particular moiety to the substrate, and e) determine whether a particular glycosyltranferase or sulfotransferase acts to transfer the particular moiety thus determining whether the substrate acts specifically with a particular glycosyltransferase orsulfotransferase The invention also includes a method fo the specific detection of a specific transferase for a specific moiety selected from sulfotransferases and glycosyltransferases.
L'invention concerne un procédé destiné à déterminer des substrats spécifiques pour une enzyme transférase choisie dans le groupe constitué par des glycosyltransférases et des sulfotransférases. Le procédé consiste (a) à sélectionner un substrat à tester en vue d'une détermination de spécificité pour les sulfotransférases et les glycosyltransférases, à partir de composés tri-, tétra- ou penta-saccharidiques contenant au moins un saccharide ?GlcNAcßl pouvant être substitué avec MeO-, EtO-, AHyI-O ou N3- et se terminant par ?3GalNAca-OR, ?3GlcNAcß-OR ou ?3Gala-O-R, R étant alkyle, aryle, azido ou allyle, tous ces éléments comportant entre 1 et 8 atomes de carbone, R pouvant être substitué par halo, -OH, alkyle inférieur, -SO3 ou NO2, (b) à combiner le substrat séparément avec chaque glycosyltransférase ou sulfotransférase en une série afin de transférer une fraction glycosyle ou sulfo particulière à un saccharide, conjointement avec un composé donneur pour la fraction particulière, cette fraction étant radiomarquée, dans une solution aqueuse tamponnée présentant un pH compris entre environ 6 et environ 7, de manière à former des mélanges d'incubation, (c) à incuber les mélanges d'incubation à une température comprise entre environ 18 et environ 40 °C pendant entre environ 30 minutes et environ quatre heures, (d) à tester les mélanges d'incubation résultants de chaque glycosyltransférase ou sulfotransférase séparée pour un produit de réaction comprenant une combinaison chimique du substrat et d'une fraction particulière en vue d'une détermination de l'efficacité de chaque glycosyltransférase ou sulfotransférase séparée en termes de transfert de la fraction particulière au substrat, et (e) à comparer l'efficacité de chaque glycosyltransférase ou sulfotransférase en termes de transfert de la fraction particulière de façon à déterminer si une glycosyltransférase ou sulfotransférase particulière peut assurer le transfert de la fraction particulière au substrat alors que les autres glycosyltransférases ou sulfotransférases ne le peuvent pas, ce qui permet de déterminer si le substrat est spécifiquement actif avec une glycosyltransférase ou sulfotransférase. L'invention concerne également un procédé destiné à la détection spécifique d'une transférase spécifique pour une fraction spécifique choisie parmi des sulfotransférases et des glycosyltransférases.
Chandrasekaran E. V.
Matta Khushi L.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Health Research Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1733640