G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/68 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)
Patent
CA 2341740
The invention relates to methods, compositions, and systems for calibrating a fluorescent polynucleotide separation apparatus. One aspect of the invention is multiple color calibration standards and their use. A multiple color calibration standard is a mixture of at least two polynucleotides of different length, wherein each of the polynucleotides is labelled with a spectrally distinct fluorescent dye. Another aspect of the invention is to produce total emission temporal profiles of multiple color calibration standards for use in calibrating fluorescent polynucleotide separation apparatus. The peaks corresponding to the fluorescently labelled polynucleotide in the total emission temporal profile may be detected using a peak detector that is driven by changes in the slopes of the total emission temporal profile. Calibration of fluorescent polynucleotide separation apparatus with various embodiments of the methods of the invention includes the step of identification of the labelled polynucleotide of the multiple color calibration standards. The process of spectral calibration of fluorescent polynucleotide separation apparatus using multiple color calibration standard may include the step of the estimating (extracting) of the dyes' reference spectra, using information from the peak detection process performed on the total emission temporal profile. Other aspects of the invention include systems for separating and detecting fluorescently labelled polynucleotide, wherein the system is designed for spectral calibration in accordance with the subject calibration methods employing multiple color calibration standards. Another aspect of the invention is methods and compositions for detecting the flow of electrical current through a separation channel of a fluorescent polynucleotide separation apparatus. These methods and compositions employ monitoring dyes. Monitoring dyes are fluorescent dyes that are spectrally distinct from the dye on the polynucleotide intended to convey genetic information, e.g., fluorescent polynucleotide sequencing reaction products.
L'invention concerne des procédés, des compositions et des systèmes destinés à étalonner un appareil de séparation de polynucléotide fluorescent. Un aspect de l'invention concerne des standards d'étalonnage à plusieurs couleurs et leurs utilisations. Un standard d'étalonnage à plusieurs couleurs est un mélange d'au moins deux polynucléotides de longueurs différentes, chacun des polynucléotides étant marqué par un colorant fluorescent spectralement distinct. Un autre aspect de l'invention concerne la production de profils temporels d'émission totale de standards d'étalonnage à plusieurs couleurs, utilisés pour étalonner un appareil de séparation de polynucléotide fluorescent. On peut détecter les pics correspondant au polynucléotide marqué par fluorescence dans le profil temporel d'émission totale, à l'aide d'un capteur de pics commandé par les modifications des pentes du profil temporel d'émission. L'étalonnage de l'appareil de séparation de polynucléotide fluorescent consiste à identifier le polynucléotide marqué de plusieurs standards d'étalonnage à plusieurs couleurs. Le procédé de l'appareil de séparation de polynucléotide fluorescents, utilisant plusieurs standards de séparation de polynucléotides fluorescent, consiste à évaluer (extraire) des spectres de référence de colorants, au moyen d'informations provenant du procédé de détection de pics exécuté sur les profils temporels d'émission totale. D'autres aspects de l'invention comprennent des systèmes permettant de séparer et de détecter un polynucléotide marqué par fluorescence, ce système étant conçu pour un étalonnage spectral conformément aux procédés d'étalonnage du sujet qui utilisent des standards d'étalonnage à plusieurs couleurs. Un autre aspect de l'invention concerne des procédés et des compositions permettant de contrôler le flux de courant électrique à travers un canal de séparation de l'appareil de séparation de polynucléotide fluorescent. Ces procédés et ces compositions utilisent des colorants de contrôle. Ces colorants de contrôle sont des colorants fluorescents spectralement distincts du colorant sur le polynucléotide destiné à acheminer des informations génétiques, par exemple des produits de réaction de séquençage de polynucléotide.
Roque-Biewer Maria C.
Sharaf Muhammad A.
Applera Corporation
Pe Corporation (ny)
Sim & Mcburney
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2018684