Spliceosome mediated rna trans-splicing

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – H

Patent

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Details

C07H 21/02 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2434118

The molecules and methods of the present invention provide a means for in vivo production of a trans-spliced molecule in a selected subset of cells. The pre- trans-splicing molecules of the invention are substrates for a trans-splicing reaction between the pre-trans-splicing molecules and a pre-mRNA which is uniquely expressed in the specific target cells. The in vivo trans-splicing reaction provides a novel mRNA which is functional as mRNA or encodes a protein to be expressed in the target cells. The expression product of the mRNA is a protein of therapeutic value to the cell or host organism a toxin which causes killing of the specific cells or a novel protein not normally present in such cells. The invention further provides PTMs that have been genetically engineered for the identification of exon/intron boundaries of pre- mRNA molecules using an exon tagging method. The PTMs of the invention can also be designed to result in the production of chimeric RNA encoding for peptide affinity purification tags which can be used to purify and identify proteins expressed in a specific cell type.

Cette invention concerne des molécules et des méthodes permettant de produire <i>in vivo</i> une molécule trans-épissée dans un sous-ensemble donné de cellules. Les molécules pré-transépissage selon l'invention sont des substrats pour réaction de trans-épissage entre les molécules pré-transépissage et le pré-ARNm qui est exprimé de manière unique dans les cellules cibles spécifiques. La réaction de trans-épissage <i>in vivo</i> produit un nouvel ARNm fonctionnel en tant que tel ou qui code pour une protéine à exprimer dans les cellules cibles. Le produit d'expression de l'ARNm est une protéine à valeur thérapeutique pour la cellule ou organisme hôte, une toxine qui provoque la mort de cellules spécifiques ou une nouvelle protéine qui n'est normalement pas présente dans de telles cellules. Cette invention concerne également des molécules pré-transépissage (PTM) créées génétiquement pour l'identification de frontières exon/intron de molécules de pré-ARNm au moyen d'une technique de marquage des introns. Les PTM de l'invention peuvent également être conçues en vue de la production d'ARN chimère codant pour des tags de purification à affinité peptidique utilisables pour la purification ou l'identification de protéines exprimées dans un type de cellule spécifique

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