C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) A61K 38/39 (2006.01) C07K 14/78 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/53 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2269801
The invention relates to a method of producing a hydroxylated triple helical protein in yeast comprising the steps of: introducing to a suitable yeast host cell a first nucleotide sequence encoding P4H .alpha. subunit, a second nucleotide sequence encoding P4H .beta. subunit and one or more product- encoding nucleotide sequences which encode(s) a polypeptide(s) or peptide(s) which, when hydroxylated, form the said hydroxylated triple helical protein, each of said first, second and product-encoding nucleotide sequences being operably linked to promoter sequences; and culturing said yeast host cell under conditions suitable to achieve expression of said first, second and product-encoding nucleotide sequences to thereby produce said hydroxylated triple helical protein; wherein said method is characterised in that the step of introducing the first, second and product-encoding nucleotide sequences results in the said first, second and product-encoding nucleotide sequences, together with their respective operably linked promoter sequences, being borne on one or more replicable DNA molecules that are stably retained and segregated by said yeast host cell during said step of culturing. Transformed yeast host cells and triple helical proteins produced in accordance with the method of the invention are also claimed.
L'invention concerne un procédé pour produire une protéine hydroxylée à triple hélice par une levure, comprenant les étapes consistant à: introduire dans une cellule de levure hôte appropriée une première séquence nucléotidique codant pour une sous-unité P4H .alpha., une seconde séquence nucléotidique codant pour une sous-unité .beta. et une ou plusieurs séquences nucléotidiques codant pour un produit qui code pour un ou des polypeptides ou peptides, qui, quant ils sont hydroxylés, forment ladite protéine hydroxylée à triple hélice, chacune des première séquence, seconde séquence et séquence nucléotidique codant pour un produit étant liée, de manière fonctionnelle, à des séquences de promoteurs; et à cultiver ladite cellule de levure hôte dans des conditions permettant d'exprimer lesdites première séquence, seconde séquence et séquence nuclétotidique codant pour un produit, pour produire ainsi une protéine hydroxylée à triple hélice. Ce procédé est caractérisé en ce que l'étape d'introduction des première séquence, seconde séquence et séquence nucléotidique codant pour un produit a pour résultat que ladite première séquence, ladite seconde séquence et ladite séquence nucléotidique codant pour un produit, en association avec leurs séquences de promoteurs respectives liées de manière fonctionnelle, sont portées par une ou plusieurs molécules d'ADN qui sont capables de se répliquer et qui sont conservées d'une manière stable en restant séparées dans ladite cellule de levure hôte durant ladite étape de culture. Les cellules de levures hôtes transformées et les protéines à triple hélice produites, selon le procédé de l'invention, sont également revendiquées.
Galanis Maria
Ramshaw John Alan Maurice
Vaughan Paul Richard
Werkmeister Jerome Anthony
Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation
Kirby Eades Gale Baker
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1441129