C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/57 (2006.01) C07K 14/18 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 15/55 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2365262
The present invention concerns the development of a cell-based assay system having improved sensitivity to HCV NS3 protease activity when compared to known assays, which is useful for screening test compounds capable of modulating (particularly inhibiting) HCV NS3 protease activity. This system provides a first construct comprising a transactivator domain joined downstream of the NS3-5 domains of HCV under the control of a non-cytopathic viral promoter system. A second construct is also provided that comprises a reporter gene under the control of an operator sensitive to the binding of the transactivator. The NS3-5 domains encodes the NS3 polyprotein which comprises: the NS3 protease, followed by the NS4A co-factor, the NS4B and NS5A proteins (including any derivative, variant or fragment thereof), terminated by the NS5B protein (including any derivative, variant or fragment thereof) sufficient to constitute a NS5A/5B cleavage site. The transactivator, when expressed and released from the polyprotein initiates transcription and expression of the reporter gene that is measurable.
La présente invention concerne le développement d'un système de dosage à base de cellules présentant une sensibilité améliorée à l'activité de la protéase NS3 du virus de l'hépatite C (VHC) par rapport aux dosages connus. Ce système présente une grande utilité pour doser des composés tests permettant de moduler (et en particulier, d'inhiber) l'activité de la protéase NS3 du VHC. Ce système fournit un premier produit de recombinaison comprenant un domaine de transactivateur lié en aval aux domaines NS3-5 du VHC sous le contrôle d'un système promoteur viral non cytopathique. Un deuxième produit de recombinaison est également fourni qui comprend un gène reporter sous le contrôle d'un opérateur sensible à la liaison du transactivateur. Les domaines NS3-5 codent la polyprotéine NS3 qui comprend la protéase NS3, suivie du co-facteur NS4A, les protéines NS4B et NS5A (y compris tout dérivé, toute variante ou tout fragment de ces dernières) terminés par la protéine NS5B (comprenant tout dérivé, toute variante ou tout fragment de cette dernière) suffisante pour constituer un site de clivage NS5A/5B. Le transactivateur, une fois exprimé et libéré par la polyprotéine, initie la transcription et l'expression du gène reporter qui peuvent être mesurées.
Lamarre Daniel
Pellerin Charles
Boehringer Ingelheim (canada) Ltd.
Looper Ywe J.
LandOfFree
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