C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2642514
A method is provided for synthesis of error-minimized nucleic acid molecules. Oligonucleotides intended to have fragments of a desired, full-length nucleotide sequence, and optionally containing other desired nucleotides, such as nucleotides for binding the oligonucleotides to a substrate, are obtained. Oligonucleotides for both strands of the desired, full-length sequence may be obtained. The oligonucleotides are amplified and assembled into a first set of molecules intended to have the desired, full-length nucleotide sequence. The first set of molecules is denatured and annealed to form a second set of molecules intended to have the desired, full-length nucleotide sequence. The second set of molecules is cut into smaller segments, for example, by mixing the molecules with endonucleases that form blunt cuts in the second set of molecules where there are sequence errors, as well as randomly along the molecules. The smaller segments are assembled into a set of molecules intended to have the desired, full-length nucleotide sequence. By promoting cutting of the molecules in this manner near the end of the nucleic acid molecule synthesis process, a set of full-length molecules can be obtained with fewer nucleotide sequence errors than can be achieved with other methods.
La présente invention a trait à un procédé de synthèse de molécules d'acides nucléiques présentant un nombre d'erreurs réduit. On obtient des oligonucléotides destinés à présenter des fragments d'une séquence nucléotidique pleine longueur souhaitée, et contenant éventuellement d'autres nucléotides souhaités, tels que des nucléotides pour lier des oligonucléotides à un substrat. On peut obtenir des oligonucléotides pour les deux brins de la séquence pleine longueur souhaitée. Les oligonucléotides sont amplifiés et assemblés en un premier ensemble de molécules destinées à présenter la séquence nucléotidique pleine longueur souhaitée. Le premier ensemble de molécules est dénaturé et renaturé pour former un second ensemble de molécules présentant la séquence pleine longueur souhaitée. Le second ensemble de molécules est découpé en de plus petits segments, par exemple, par le mélange des molécules avec des endonucléases qui réalisent des coupures franches dans le second ensemble de molécules, là où il existe des erreurs de séquence, ainsi qu'aléatoirement le long des molécules. Les plus petits segments sont assemblés en un ensemble de molécules destinées à présenter la séquence nucléotidique pleine longueur souhaitée. En favorisant la coupure des molécules de cette manière vers la fin du procédé de synthèse de molécules d'acides nucléiques, un ensemble de molécules pleine longueur peut être obtenu avec moins d'erreurs dans la séquence nucléotidique qu'il n'est possible de réaliser par d'autres procédés.
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Synthetic Genomics Inc.
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2015400