G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 27/447 (2006.01)
Patent
CA 2686254
Significantly higher yield and better resolution in pi gels are obtained by creating traps having two or more layers of gel (26, 28) containing closely stepped immobilized pH buffers. Proteins move from a pH at which they are negatively charged towards an anode at which they are positively charged. The gel layers (26, 28) containing immobilized pH buffers trap the proteins when the immobilized buffer pH and the protein pi are approximately the same. The protein is trapped within the second layer and not on the surface of or interface of the second layer.
L'invention concerne l'obtention d'un rendement sensiblement supérieur et d'une résolution sensiblement meilleure dans des gels pi en créant des pièges ayant au moins deux couches de gel contenant des tampons de pH immobilisés étagés de manière serrée. Des protéines se déplacent à partir d'un pH auquel elles sont négativement chargées vers une anode à laquelle elles sont chargées positivement. Des régions discrètes contenant des tampons de pH immobilisés piègent les protéines lorsque le tampon de pH immobilisé et la protéine pi sont approximativement identiques. La protéine est piégée dans la seconde couche, et non sur la surface de la seconde couche, ou l'interface de celle-ci. Des rendements sensiblement supérieurs avec une meilleure résolution peuvent être obtenus par l'utilisation de gels d'application d'échantillon en couches avant la focalisation isoélectrique. Des bouchons en couches sont préparés avec une gamme de tampons de pH immobilisés allant, par exemple, de plus de deux unités de pH, avec des paliers de 0,05 ou 0,1 unité de pH. Un réseau de bouchons multicouches dans lesquels chaque bouchon a des incréments de pH différents est également fourni. Le réseau peut être utilisé pour isoler et piéger diverses protéines ayant des pH isoélectriques différents pendant un simple fonctionnement unique. Un autre mode de réalisation fournit des bouchons ayant au moins trois couches : une couche de grille, une couche de piégeage et une couche de sortie. Un autre mode de réalisation comprend l'adjonction d'ampholytes de porteur à des tampons en fonctionnement et/ou l'adjonction d'agents réducteurs contenant du thiol afin de réduire le courant et d'améliorer la résolution et l'efficacité de captage.
Garlick Russell K.
Haralampu Stephen
Johansen Jack
Kagan Oren
Skea William
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Protein Forest Inc
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1783510