C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) A61K 39/095 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C07K 14/16 (2006.01) C07K 14/22 (2006.01) C07K 16/12 (2006.01) C12N 15/31 (2006.01) C12N 15/48 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01)
Patent
CA 2214840
The present invention relates to biotechnology and genetic engineering, particularly the expression of heterologous proteins in microorganisms through their fusion, by applying the recombinant DNA technology, to bacterial peptides. The present invention provides an efficient process for the expression in Escherichia coli of heterotogous proteins as fusion polypeptides with a view to obtaining them with a high degree of purity, in commercially useful amounts, and in a oppropriate form for their inclusion in vaccine preparations intended to human use. To this effect, what is essentially used is a stabilizing sequence derived from the first 47 aminoacids of the antigen P64k of Neisseria meningitidis B:4 :P1.15. In particular, use is made of a recombinant plasmide containing said sequence, under the control of the triptophane promotor of E. coli and of the terminator of the transcription of the phage T4, including restriction sites which provide for the cloning in phase of DNA fragments coding for polypeptides of interest. The process of the invention is applicable to the pharmaceutical industry, for the development of diagnostic systems, vaccine preparations, and in any situation where it is required to obtain high amounts of heterologous proteins as fusion polypeptides in E. coli.
La présente invention concerne la biotechnologie et l'ingénierie génétique, en particulier l'expression de protéines hétérologues par des micro-organismes par l'intermédiaire de leurs fusions, par application de la technologie de l'ADN recombinant, ayant peptides bactériens. La présente invention fournit un procédé efficace d'expression dans Escherichia coli de protéines hétérologues en tant que polypeptides de fusion en vue de leur obtention avec un degré élevé de pureté, en quantités commercialement utiles, et sous une forme permettant leur inclusion dans des préparations vaccinales destinées à un usage chez les êtres humains. A cet effet, on utilise essentiellement une séquence stabilisatrice dérivée des premiers 47 aminoacides de l'antigène P64k de Neisseria meningitidis B:4 :P1.15. En particulier, on utilise un plasmide recombinant contenant ladite séquence sous le contrôle du promoteur triptophane de E. coli et de la terminaison de la transcription du phage T4, y compris des sites de restriction qui permettent le clonage en phase de fragments d'ADN codant pour des polypeptides d'intérêt. Le procédé de la présente invention s'applique à l'industrie pharmaceutique, au développement de systèmes de diagnostic, à des préparations vaccinales, et dans toute situation où il est nécessaire d'obtenir de grandes quantités de protéines hétérologues en tant que polypeptides de fusion dans E. coli.
Alvarez Acosta Anabel
Carpio Munoz Emilio Luis
Duarte Cano Carlos Antonio
Gomez Rodriguez Carmen Elena
Guillen Nieto Gerardo Enrique
Centro de Ingenieria Genetica Y. Biotecnologia (cigb)
Macrae & Co.
LandOfFree
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