A - Human Necessities – 61 – K
Patent
A - Human Necessities
61
K
A61K 39/04 (2006.01) A61K 39/02 (2006.01) A61K 39/112 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) A61K 39/21 (2006.01) C07K 14/74 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2374070
A transposable element is provided that as a 3' and a 5' end. The transposable element includes a 5' recombining site 5' of a nucleic acid sequence encoding a selectable marker, a 3' recombining site 3' of the nucleic acid sequence encoding a selectable marker, a nucleic acid sequence encoding and MHC epitope 5' to the 5' recombining site or 3' to the 3' recombining site, and an insertion end comprising an inverted repeat sequence sufficient for integration of the transposable element at the 5' and the 3' end of the transposable element. In one embodiment, a transposable element is provided that has a 5' and a 3' end. The transposable element includes a 5' loxP sequence 5' of a nucleic acid encoding a selectable marker, a 3' loxP sequences 3' of a nucleic acid encoding the selectable marker, an MHC epitope 5' to the 5' loxP sequences or 3' of the 3' loxP sequence, an insertion end at the 5' end of the transposable element, and an insertion end at the 3' of the transposable element. A method is provided for detecting an antigenic epitope of a pathogen by infecting a pathogenic cell with a transposable element of the invention, wherein the infection results in the integration of the transposable element in a nucleic acid sequence of the bacterial cell; transforming the pathogenic cell with a vector comprising a transposase; contacting a eukaryotic cell that can internalize the pathogenic cell with the pathogenic cell infected with the transposable element; contacting the eukaryotic cell with a specific binding partner that recognizes the MHC epitope; identifying the labeled eukaryotic cells and externalizing the bacteria cell. The externalized bacterial cell may be grown to produce a population of bacterial cells, and the nucleic acid sequence of the bacterial cell that has the integrated transposable element is identified. This nucleic acid sequence encodes the antigenic element of the panthogen. A method is also provided for generating a carrier vaccine by infecting a bacterial cell with the transposable element of the invention, wherein the transposable further comprises an antigen associated with a disease operably linked to the MHC epitope of the transposable element. The infection of the bacteria results in the integration of the transposable element in a nucleic acid sequence of the bacterial cell. The pathogenic cell is then internalized into a eukaryotic cell and the eukaryotic cell is exposed to a specific bindind agent that recognizes the MHC epitope, identifying labeled eukaryotic cells are identified and lysed to externalize the bacteria cell, which is cultured to produce a population of bacterial cells. The nucleic acid sequence of the bacterial cell that has the integrated transposable element is identified, wherein the nucleic acid sequence encodes the antigenic element of the pathogen. The graving bacterial cell identified, and may be used as the carrier vaccine.
L'invention concerne un élément transposable présentant une extrémité 3' et une extrémité 5'. L'élément transposable comprend un site 5' de recombinaison en 5' d'une séquence d'acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, un site 3' de recombinaison en 3' de la séquence d'acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, une séquence d'acide nucléique codant un épitope du CMH en 5' par rapport au site de recombinaison 5' ou en 3' par rapport au site de recombinaison 3', ainsi qu'une extrémité d'insertion contenant une séquence à répétition inversée suffisante à l'intégration de l'élément transposable à l'extrémité 5' et à l'extrémité 3' de l'élément transposable. Dans un mode de réalisation, un élément transposable est prévu lequel présente une extrémité 5' ainsi qu'une extrémité 3'. L'élément transposable contient une séquence loxP5' en 5' d'un acide nucléique codant un marqueur sélectionnable, une séquence loxP3' en 3' d'un acide nucléique codant le marqueur sélectionnable, un épitope du CMH en 5' par rapport aux séquences loxP5' ou en 3' de la séquence loxP3', une extrémité d'insertion à l'extrémité 5' de l'élément transposable, ainsi qu'une extrémité d'insertion en 3' de l'élément transposable. L'invention concerne également une méthode de détection d'un épitope antigénique d'un agent pathogène par infection d'une cellule pathogène avec un élément transposable de l'invention, dans laquelle l'infection a pour résultat l'intégration de l'élément transposable dans une séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne, transformation de la cellule pathogène avec un vecteur contenant une transposase, contact d'une cellule eucaryote pouvant internaliser la cellule pathogène avec la cellule pathogène infectée par l'élément transposable, contact de la cellule eucaryote avec un partenaire de liaison spécifique reconnaissant l'épitope du CMH, identification des cellules eucaryotes marquées et externalisation de la cellule bactérienne. La cellule bactérienne externalisée peut être développée afin de produire une population de cellules bactériennes, et la séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne présentant l'élément transposable intégré est identifiée. Cette séquence d'acide nucléique code l'élément antigénique de l'agent pathogène. L'invention concerne également une méthode de production d'un vaccin porteur par infection d'une cellule bactérienne avec l'élément transposable de l'invention, dans laquelle l'élément transposable contient également un antigène associé à une maladie liée fonctionnellement à l'épitope du CMH de l'élément transposable. L'infection de la bactérie a pour résultat l'intégration de l'élément transposable dans une séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne. La cellule pathogène est alors internalisée dans une cellule eucaryote et la cellule eucaryote est exposée à un agent de liaison spécifique reconnaissant l'épitope du CMH, les cellules eucaryotes marquées d'identification sont identifiées et lysées afin d'externaliser la cellule bactérienne, laquelle est mise en culture pour produire une population de cellules bactériennes. La séquence d'acide nucléique de la cellule bactérienne présentant l'élément transposable intégré est identifiée, dans laquelle la séquence d'acide nucléique code l'élément antigénique de l'agent pathogène. La cellule bactérienne en développement est identifiée et peut être utilisée comme vaccin porteur.
Ellefson Dolph D.
Heffron Fred L.
Parker David C.
Oregon Health And Science University
Smart & Biggar
LandOfFree
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