Targeted genetic manipulation using mu bacteriophage cleaved...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2422366

Compositions and methods for targeted genetic manipulation of an organism are provided. The compositions are novel integration vectors derived from the Mu bacteriophage comprising an active cleaved donor complex (CDC) and further comprising a targeting mechanism whereby integration of the Mu transposable cassette may be directed to a predetermined target site within a host organism's genome. These integration vectors comprise a Mu transposable cassette and one or more navigator elements that direct targeted insertion of the CDC. Methods of the invention utilize the integration vectors of the invention to insert the Mu transposable cassette into a target site of an organism's genome. The insertion occurs in the absence of the MuB accessory protein. The methods are useful for modulating activity of known genes and for targeting integration of nucleotide sequences of interest into a specific location of an organism's genome. Accordingly, the methods may also be used to create gene disruptions and knockouts.

L'invention concerne des compositions et des procédés de manipulation génétique ciblée d'un organisme. Ces compositions sont de nouveaux vecteurs d'intégration dérivés du bactériophage Mu comportant un complexe de donneur clivé actif (CDC) et également un mécanisme de ciblage permettant l'intégration de la cassette transposable Mu pouvant être dirigé vers un site cible prédéterminé à l'intérieur du génome d'un organisme hôte. Ces vecteurs d'intégration comprennent une cassette transposable Mu et un ou plusieurs élément(s) de navigation dirigeant l'insertion ciblée du CDC. Les différents procédés de cette invention emploient les vecteurs d'intégration afin d'insérer la cassette transposable Mu dans le site cible du génome d'un organisme. L'insertion se produit en l'absence de la protéine accessoire MuB. Ces procédés servent à moduler l'activité de gènes connus et à cibler l'intégration de séquences de nucléotides présentant un intérêt dans un site spécifique du génome d'un organisme. De même, ces procédés pourront également servir à créer des disruptions et des éjections de gènes.

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