G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/92 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2353963
This invention provides means of measuring oxidative response of cells without recourse to preparation of cell culture. The process consists of: 1) preparing suspensions of cells from a living host in isotonic solutions, 2) preparing samples of test materials in isotonic solution containing tagged choline, 3) adding the cells suspension prepared in step 1 to the samples prepared in step 2, 4) incubating the product of step 3 with shaking for 2-90 minutes, 5) extracting and drying the lipid phase from the product of step 4, and 6) measuring the choline that has been incorporated onto PC in the product of step 5. An increase in incorporation of choline into PC in the short term indicates oxidative stress of free radical induced damage. Because the method of the invention using the cell isolates does not require the expense of cell culture with concomitant expense and possibility of cell change, it is particularly useful for clinical evaluation. Furthermore, the ability to use erythrocytes for study of cellular response to oxidative stress makes it possible to test individual responses of patient using part of the blood sample drawn routinely for laboratory use.
L'invention concerne des moyens de mesure de la réponse oxydative de cellules, sans préparation de culture de cellules. Ce procédé comprend les étapes consistant: 1) à préparer des suspensions de cellules provenant d'un hôte vivant dans des solutions isotoniques, 2) à préparer des échantillons de matériaux d'essai dans une solution isotonique contenant une choline étiquetée, 3) à ajouter la suspension de cellules préparée dans l'étape 1 aux échantillons préparés dans l'étape 2, 4) à faire incuber le produit de l'étape 3 tout en l'agitant pendant 2 à 90 minutes, 5) à extraire du produit de l'étape 4 la phase lipide et à sécher celle-ci, et 6) à mesurer la choline incorporée dans la phosphatidylcholine dans le produit de l'étape 5. Une augmentation de l'incorporation de choline dans la phosphatidylcholine, à court terme, indique une agression oxydative ou un dommage induit par des radicaux libres. Etant donné que dans le procédé de l'invention on utilise des isolats de cellules et que l'on n'a pas à faire la dépense d'une culture de cellules, laquelle peut entraîner des frais concomitants et la possibilité d'un changement de cellules, on peut notamment utiliser ces isolats dans une évaluation clinique. En outre, la possibilité d'utiliser des érythrocytes pour l'étude de la réponse cellulaire à l'agression oxydative rend possible l'essai de réponses individuelles d'un patient, à l'aide d'une partie d'un échantillon sanguin prélevé de manière classique pour un usage de laboratoire.
Lamb Robert G.
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1983462