The cytoplasmic inhibition of gene expression

Details The cytoplasmic inhibition of gene expression The cytoplasmic inhibition of gene expression

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/83 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/53 (2006.01) C12N 15/60 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)

Patent

CA 2193094

One aspect of the invention is to provide novel genetic constructions for the expression of inhibitory RNA in the cytoplasm of eukaryotic cells. The inhibitory RNA may be an anti-sense RNA or a co-suppressor RNA. The genetic constructions of the invention are capable of replicating in the cytoplasm of a eukaryotic cell and comprise a promoter region in functional combination with an encoding polynucleotide. The genetic constructions may be designed so as to replicate in the cytoplasm of plant cells, yeast cells, and mammalian cells. When the eukaryotic cell of interest is a plant cell, the genetic construction is preferably derived from a plant RNA virus. Plant RNA virus derived genetic constructions may employ a plant virus subgenomic promoter, including subgenomic promoters from tobamoviruses in functional combination with the RNA encoding region. Another aspect of the invention is to provide cells comprising the genetic constructions of the invention and organism comprising a plurality of such cells. Another aspect of the invention is to provide methods of reducing the expression of a gene of interest in eukaryotic cells, i.e., methods of producing eukaryotic cells exhibiting reduced levels of expression of a gene of interest. The methods of the invention comprise the step of transfecting a cell with a genetic construction of the invention in which the RNA encoding region is specific for the gene of interest. Another aspect of the invention is to provide plant cells that produce elevated levels of the carotenoid phytoene. The elevated levels of phytoene are achieved by inhibiting the expression at the enzyme phytoene desaturase using the vectors of the invention.

Un aspect de l'invention concerne de nouvelles structures génétiques s'appliquant à l'expression de l'ARN inhibiteur dans le cytoplasme des cellules eucaryotiques. L'ARN inhibiteur peut être un ARN antisens ou un ARN co-suppresseur. Les structures génétiques de l'invention peuvent effectuer une réplication dans le cytoplasme d'une cellule eucaryotique et comporter une région promotrice en combinaison fonctionnelle avec un polynucléotide codant. Les structures génétiques peuvent être conçues de façon à effectuer une réplication dans le cytoplasme des cellules végétales, des cellules de levure et des cellules mammaliennes. Lorsque la cellule eucaryotique est une cellule végétale, la structure génétique est de préférence dérivée d'un virus végétal d'ARN. Les structures génétiques dérivées du virus végétal d'ARN peuvent utiliser un promoteur sous-génomique de virus végétal, y compris des promoteurs sous-génomiques provenant des tobamovirus en combinaison fonctionnelle avec la région codante de l'ARN. Un autre aspect de l'invention concerne des cellules comprenant les structures génétiques de l'invention et un organisme comprenant une pluralité de ces cellules. Un autre aspect de l'invention concerne des procédés de réduction de l'expression d'un gène spécifique dans les cellules eucaryotiques, c.-à-d. des procédés de production de cellules eucryotiques présentant des niveaux réduits d'expression d'un gène spécifique. Les procédés de l'invention consistent à transfecter une cellule ayant une structure génétique de l'invention dans laquelle la région codant l'ARN est spécifique dudit gène. Enfin, un autre aspect de l'invention concerne des cellules végétales produisant des niveaux élevés de phytoène caroténoïde. Les niveaux élevés de phytoène sont obtenus par l'inhibition de l'expression au niveau de l'enzyme phytoène dénaturase à l'aide des vecteurs de l'invention.

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