Tissue preservation and fixation method

Details Tissue preservation and fixation method Tissue preservation and fixation method

A - Human Necessities

01

N

A01N 1/00 (2006.01) G01N 1/30 (2006.01)

Patent

CA 2667790

This invention relates, e.g., to a composition that, at room temperature, when contacted with a sample comprising phosphoproteins, can fix and stabilize cellular phosphoproteins, preserve cellular morphology, and allow the sample to be frozen to generate a cryostat frozen section suitable for molecular analysis. The composition comprises ( 1 ) a fixative that is effective to fix the phosphoproteins, and that has a sufficient water content to be soluble for a stabilizer and/or a permeability enhancing agent); (2) a stabilizer, comprising (a) a kinase inhibitor and (b) a phosphatase inhibitor and, optionally, (c) a protease (e.g., proteinase) inhibitor; and (3) a permeability enhancing agent (e.g. PEG). Methods are described for preserving phosphoproteins, using such a composition. Also described are endogenous surrogate markers for monitoring protein degradation, including the loss of posttranslational modifications (such as phosphorylation), e.g. the following removal of a cell or tissue from a subject; and exogenous molecular sentinels (e.g. phosphoproteins attached to magnetic nanoparticles) that allow one to evaluate the processing history of a cellular or tissue population sample.

L'invention concerne, par exemple, une composition qui, à température ambiante, lorsqu'elle est mise en contact avec un échantillon comprenant des phosphoprotéines, peut fixer et stabiliser des phosphoprotéines cellulaires, conserver la morphologie cellulaire, et permettre à l'échantillon d'être congelé afin que soit générée une section congelée de cryostat à utiliser pour une analyse moléculaire. La composition comprend (1) un fixateur conçu pour fixer les phosphoprotéines, et qui présente une teneur en eau suffisante pour être soluble pour un stabilisant et/ou un agent augmentant la perméabilité; (2) un stabilisant, qui comprend (a) un inhibiteur de kinase et (b) un inhibiteur de phosphatase et, éventuellement, (c) un inhibiteur de protéase (par exemple, de protéinase); et (3) un agent augmentant la perméabilité (par exemple, PEG). L'invention concerne également des procédés pour la conservation de phosphoprotéines dans lesquels ladite composition est utilisée. L'invention concerne également des marqueurs de substitution endogènes qui permettent de surveiller la dégradation des protéines, notamment la perte de modifications post-translationnelles (de type phosphorylation), par exemple l'élimination d'une cellule ou d'un tissu d'un sujet; et des sentinelles moléculaires exogènes (par exemple des phosphoprotéines fixées sur des nanoparticules magnétiques) qui permettent d'évaluer l'historique de traitement d'un échantillon d'une population de cellules ou de tissus.

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