C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01)
Patent
CA 2360064
Regulatory elements responsible for tissue-specific transcriptional regulation of the human .beta.3-adrenergic receptor (.beta.3-AR) are identified. A region localized between -6.50 and -6.30 kb of the proximal promoter contained three sequences that act synergistically to achieve full transcriptional activity. One segment, termed segment A, contains an Sp1 binding site. Another of the sequences, termed segment B, is a binding site for a trans-acting factor present in cells that constitutively express .beta.3-AR. In a specific embodiment, the trans-acting factor is expressed in neuroblastoma (SK-N-MC) and brown adipose tissue cells, but little or not at all in CV-1, HeLa, or white adipose tissue cells. The third segment, C, is an S1 nuclease-sensitive site having CCTT repeats. Recombinant vectors under control of this transcriptional regulation region, particularly containign the B and C segments, provide a substrate for high throughput assays, such as reporter gene assays, to identify compounds that can increase the level of expression of .beta.3-AR. The B segment nucleic acids also provide for isolation and cloning of the trans-acting factor. Mechanisms of transcriptional regulation and identification of other adjacent proteins involved in the regulation of the h.beta.3-AR gene expression are provided.
L'invention concerne des éléments régulateurs responsables de la régulation transcriptionnelle spécifique de tissu du récepteur (.beta.¿3?-AR) .beta.¿3?-adrénergique chez l'homme. Cette invention concerne aussi une région située entre -6,50 et -6,30 kb du promoteur proximal contenant trois séquences qui agissent en synergie pour réaliser une activité transcriptionnelle complète. Un segment, appelé segment A, contient un site de liaison SP1. Une autre des séquences, appelée segment B, est un site de liaison pour un facteur trans-activateur présent dans des cellules qui expriment de manière constitutive (.beta.¿3?-AR). Selon un mode de réalisation spécifique, le facteur trans-activateur est exprimé dans le neuroblastome (SK-N-MC) et dans des cellules de tissu adipeux brun, mais peu ou pas du tout dans CV-1, HeLa, ou dans des cellules de tissu adipeux blanc. Le troisième segment, C, est un site sensible au nucléase S1, possédant des séquences nucléotidiques répétées CCTT. Des vecteurs recombinés contrôlant cette région de régulation transcriptionnelle, contenant notamment les segments B et C, produisent un substrat pour des dosages à débit élevé, tels que les dosages du gène rapporteur, afin d'identifier des composés qui peuvent faire augmenter le niveau d'expression de (.beta.¿3?-AR). Les acides nucléiques du segment B sont également responsables de l'isolation et du clonage du facteur trans-activateur. Cette invention a trait, en outre, aux mécanismes de régulation et d'identification transcriptionnelles des autres protéines adjacentes intervenant dans la régulation de l'expression génique h.beta.¿3?-AR.
Duzic Emir
Susulic Vedrana S.
American Home Products Corporation
Smart & Biggar
Wyeth
LandOfFree
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