C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/87 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)
Patent
CA 2354562
A process is described for preparing transfectacons, or particles, of calcium phosphate and a desired nucleic acid comprising admixing calcium divalent cation, phosphate multivalent anion, and the desired nucleic acid to form a precipitation mixture, wherein the precipitation mixture comprises an initial phosphate anion concentration of about 0.2 to 0.5 mM; and incubating the precipitation mixture for about 10 to 60 minutes to form transfectacons comprising calcium phosphate and the desired nucleic acid. A process is also provided for delivering desired nucleic acid to eukaryotic tissue or cells comprising introducing to the tissue or cells the transfectacons so prepared. Additionally, a process is disclosed for introducing a desired nucleic acid into an eukaryotic host cell comprising the above two steps, followed by diluting the precipitation mixture and admixing it with an eukaryotic host cell lacking a cell wall to form a transfection mixture; and incubating the transfection mixture to allow the eukaryotic host cell to take up the transfectacons to form a transfected cell.
L'invention concerne un procédé permettant de préparer des tranfectacons ou des particules composés de phosphate de calcium et d'un acide nucléique désiré. Ce procédé consiste à mélanger un cation calcium divalent, un anion phosphate polyvalent et l'acide nucléique désiré afin d'obtenir un mélange de précipitation présentant une concentration initiale en anion phosphate comprise entre 0,2 et 0,5 mM environ, puis à incuber ce mélange de précipitation pendant 10 à 60 minutes environ pour former des transfectacons comprenant du phosphate de calcium et l'acide nucléique désiré. L'invention concerne également un procédé permettant d'introduire l'acide nucléique désiré dans le tissu ou une cellule eucaryote. Ce procédé consiste à introduire les transfectacons ainsi obtenus dans le tissu ou dans les cellules. L'invention concerne en outre un procédé permettant d'introduire un acide nucléique désiré dans une cellule hôte eucaryote comprenant les deux étapes décrites ci-dessus suivies d'une dilution du mélange de précipitation et d'un mélange de ce dernier avec une cellule hôte eucaryote dépourvue de paroi cellulaire afin de former un mélange de transfection. Ensuite on incube ce mélange de transfection pour permettre à la cellule hôte eucaryote d'absorber les transfectacons afin de former une cellule transfectée
Cohen Darien L.
Kahn David W.
Winkler Marjorie E.
Genentech Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1528602