Transformation of pichia methanolica

Details Transformation of pichia methanolica Transformation of pichia methanolica

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/81 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01)

Patent

CA 2261151

Methods for transforming Pichia methanolica, and DNA molecules useful in transformation of P. methanolica, are disclosed. P. methanolica cells are exposed, in the presence of DNA molecules, to a pulsed electric field having a field strength of from 2.5 to 4.5 kV/cm and a pulse duration of from 1 to 40 milliseconds, whereby the DNA molecules are introduced into the cells. The DNA molecules may comprise an expression unit that includes a transcription promoter of a P. methanolica gene operably linked to a segment encoding a polypeptide or protein of interest. The DNA molecules may also encode a selectable marker, such as a P. methanolica ADE2 gene. Cells transformed according to the invention may be used in production systems for the preparation of proteins of commercial importance.

Procédés pour la transformation de Pichia méthanolica, et molécules d'ADN utiles dans cette transformation. En présence de molécules d'ADN, les cellules de P. méthanolica sont exposées à un champ électrique pulsé dont l'intensité varie entre 2,5 et 4,5 kV/cm, moyennant une durée d'impulsion comprise entre 1 et 40 millisecondes, et les molécules d'ADN sont ainsi introduites dans les cellules. Ces molécules d'ADN peuvent comprendre une unité d'expression renfermant un promoteur de transcription de gène P. méthanolica lié de manière opérationnelle à un segment qui code un polypeptide ou une protéine présentant de l'intérêt. Les molécules d'ADN peuvent aussi coder un marqueur sélectionnable, par exemple le gène ADE2 de P. méthanolica. Il est possible d'utiliser les cellules ainsi transformées dans les systèmes de production servant à préparer les protéines qui ont une certaine importance commerciale.

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