C - Chemistry – Metallurgy – 40 – B
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
40
B
C40B 40/06 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 50/06 (2006.01) C40B 70/00 (2006.01)
Patent
CA 2750054
The present invention provides methods, compositions and kits for using a transposase and a transposon end for generating extensive fragmentation and 5'-tagging of double-stranded target DNA in vitro, then using a DNA polymerase for generating 5'- and 3'-tagged single-stranded DNA fragments without performing a PCR amplification reaction, wherein the first tag on the 5'-ends exhibits the sequence of the transferred transposon end and optionally, an additional arbitrary sequence, and the second tag on the 3'-ends exhibits a different sequence from the sequence exhibited by the first tag. The method is useful for generating 5'- and 3'-tagged DNA fragments for use in a variety of processes, including processes for metagenomic analysis of DNA in environmental samples, copy number variation (CNV) analysis of DNA, and comparative genomic sequencing (CGS), including massively parallel DNA sequencing (so-called "next-generation sequencing.)
La présente invention concerne des procédés, des compositions et des kits pour utiliser une transposase et une extrémité de transposon pour générer une fragmentation importante et un marquage en 5 dun ADN cible double-brin in vitro, puis utiliser une ADN polymérase pour générer des fragments dADN simple brin, marqués en 5 et 3 sans réaliser de réaction damplification PCR, le premier marqueur sur lextrémité 5 présentant la séquence de lextrémité de transposon transférée et le cas échéant, une séquence arbitraire supplémentaire, et le deuxième marqueur sur lextrémité 3 présentant une séquence différente de la séquence du premier marqueur. Le procédé est utile pour générer des fragments dADN marqués en 5 et en 3, à utiliser dans une série de procédés, y compris des procédés danalyse métagénomique dADN dans des échantillons environnementaux, danalyse de la variation du nombre de copie (CNV) de lADN, et de séquençage génomique comparatif (CGS), notamment de séquençage massif parallèle dADN (dit « séquençage de génération suivante »).
Caruccio Nicholas
Dahl Gary
Grunenwald Haiying Li
Jendrisak Jerome
Epicentre Technologies Corporation
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1822786