Two-dimensional strandness- and length-dependent separation...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/10 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01) G06F 19/00 (2006.01)

Patent

CA 2614580

A method is provided for separating single- and double-stranded nucleic acid molecules based on their strandness and length. The method is based on novel two-dimensional gel electrophoresis techniques comprises loading a sample of nucleic acid molecules in a gel electrophoresis apparatus and electrophoresing in a first dimension said sample through a gel matrix under a first set of pre- determined electrophoresis conditions; electrophoresing said gel matrix in a second dimension under a second set of electrophoresis conditions, such that populations of single- and double-stranded nucleic acids are separated, said first and second electrophoresis conditions being different, such that in one dimension electrophoresis allows separation of the sample molecules based on strandness and length, and in the other dimension electrophoresis allows separation based substantially on length, wherein said difference is established with a chemical agent and/or physical parameter affecting the strandness-dependent electrophoresis migration rate of nucleic acids

La présente invention a trait à un procédé pour la séparation de molécules d'acides nucléiques à simple brin et à double brin basée sur leur caractère de brin et leur longueur. Le procédé repose sur de nouvelles techniques d'électrophorèse en gel en deux dimensions comportant le chargement d'un échantillon de molécules d'acides nucléiques dans l'appareil d'électrophorèse en gel et la réalisation d'une électrophorèse dans une première dimension sur l'échantillon par une matrice de gel dans un premier ensemble de conditions d'électrophorèse prédéterminées; d'une électrophorèse de ladite matrice de gel dans une deuxième dimension, de sorte que les populations des acides nucléiques à simple brin et à double brin sont séparées, lesdites première et deuxième conditions d'électrophorèse étant différentes, de sorte que dans une dimension, l'électrophorèse permet la séparation des molécules de l'échantillon sur la base du caractère de leur brin et de longueur, et dans l'autre dimension l'électrophorèse permet la séparation basée essentiellement sur la longueur, ladite différence étant établie avec un agent chimique et/ou un paramètre physique affectant le taux de migration de l'électrophorèse dépendante du caractère de brin d'acides nucléiques.

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