C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/54 (2006.01) C07K 16/40 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2350079
A novel gene defining a novel enzyme in the UDP-D-galactose: .beta.-N- acetylglucosamine/.beta.-N-acetylgalactosamine .beta.1,3galactosyltransferase family, termed .beta.3Gal-T5, with unique enzymatic properties is disclosed. The enzymatic activity of .beta.3Gal-T5 is shown to be distinct from that of previously identified enzymes of this gene family. The invention discloses isolated DNA molecules and DNA constructs encoding .beta.3Gal-T5 and derivatives thereof by way of amino acid deletion, substitution or insertion exhibiting .beta.3Gal-T5 activity, as well as cloning and expression vectors including such DNA, cells tranfected with the vectors, and recombinant methods for providing .beta.3Gal-T5. The enzyme .beta.3Gal-T5 and .beta.3Gal-T5-active derivatives thereof are disclosed, in particular soluble derivatives comprising the catalytically active domain of .beta.3Gal-T5. Further, the invention discloses methods of obtaining .beta.1,3galactosyl glycosylated saccharides, glycopeptides or glycoproteins by use of an enzymically active .beta.3Gal-T5 protein or fusion protein thereof or by using cells stably transfected with a vector including DNA encoding an enzymatically active .beta.3Gal-T5 protein as an expression system for recombinant production of such glycopeptides or glycoproteins. Also a method for the identification of DNA sequence variations in the .beta.3Gal-T5 gene by isolating DNA from a patient, amplifying .beta.3Gal-T5-coding exons by PCR, and detecting the presence of DNA sequence variation, are disclosed.
La présente invention concerne un gène définissant une nouvelle enzyme de l'UDP-D-galactose, en l'occurrence la famille des .beta.-N-acétyle-glucosamine et .beta.-N-acétyle-galactosamine .beta.1,3 galactosyle-transférase ou "3Gal-T5", lesquelles transférases présentent des propriétés enzymatiques uniques. L'activité enzymatique du 3Gal-T5 s'avère distincte de celle d'enzymes déjà identifiées dans cette famille de gènes. L'invention concerne également des molécules d'ADN isolées et des constructions d'ADN codant .beta.3Gal-T5 et certains de leurs dérivés par suppression, substitution ou insertion d'acide aminé présentant une activité .beta.3Gal-T5. L'invention concerne en outre des vecteurs de clonage et d'expression incluant un tel ADN, des cellules transfectées de ces vecteurs et des techniques de recombinaison donnent une telle .beta.3Gal-T5. L'invention concerne de plus l'enzyme .beta.3Gal-T5 et certains de ses dérivés à activité .beta.3Gal-T5, en particulier des dérivés solubles comportant le domaine catalytiquement actif de la .beta.3Gal-T5. L'invention concerne aussi des procédés d'obtention de saccharides, glycopeptides ou de glycoprotéines glycosylées du .beta.1,3galactosyle par utilisation d'une protéine .beta.3Gal-T5 enzymatiquement active, ou de l'une de ses protéines de fusion, ou par utilisation de cellules transfectées de façon stable d'un vecteur, et notamment un ADN codant une protéine .beta.3Gal-T5 enzymatiquement active sous forme d'un système d'expression pour production par recombinaison de telles glycopeptides ou glycoprotéines. L'invention concerne enfin l'identification de variations des séquences d'ADN dans le gène .beta.3Gal-T5 par isolation d'ADN d'un patient, amplification des exons codant la .beta.3Gal-T5 (par réaction en chaîne de la polymérase, et détection de la présence d'une variation de séquence d'ADN.
Amado Margarida
Clausen Henrick
Clausen Henrick
Osler Hoskin & Harcourt Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1345550