Udp-n-acetylglucosamine:...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/54 (2006.01) A61K 31/7088 (2006.01) A61K 38/45 (2006.01) A61K 39/395 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07K 16/40 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12P 19/18 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 30/08 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)

Patent

CA 2384978

A novel gene defining a novel human UDP-GlcNAc: Gal.beta.1-3GAlNAc.alpha. .beta.1, 6GlcNAc-transferase, termed C2GnT3, with unique enzymatic properties is disclosed. The invention discloses isolated DNA molecules and DNA constructs encoding C2GnT3, as well as cloning and expression vectors including such DNA. The enzyme C2GnT3 -active derivatives thereof are disclosed, in particular soluble derivatives comprising the catalytically active domain of C2GnT3. Further, the invention discloses methods of obtaining 1,6-N-acetylglucosaminyl glycosylated saccharides, glycopeptides or glycoproteins by use of an enzymatically active C2GnT3 protein or fusion protein thereof or by using cells stably transfected with a vector including DNA encoding an enzymatically active C2GnT3 protein. Methods are disclosed for the identification of agents with the ability to inhibit or stimulate the biological activity of C2GnT3.

L'invention se rapporte à un nouveau gène définissant une nouvelle UDP-GlcNAc: la Gal.beta.1-3GalNAc.alpha. .beta., 6GlcNAc-transférase, désignée par C2GnT3, qui présente des propriétés enzymatiques uniques. Il a été démontré que l'activité enzymatique de C2GnT3 est différente de celle des autres enzymes de cette famille génétique, identifiés antérieurement. L'invention concerne des molécules d'ADN isolées et des ADN recombinés codant pour C2GnT3, ainsi que des dérivés de cette dernière obtenus par délétion, substitution ou insertion d'acides aminés et présentant une activité C2GnT3, ainsi que des vecteurs de clonage et d'expression contenant un tel ADN, des cellules transfectées avec ces vecteurs et des procédés de recombinaison permettant de produire la C2GnT3. L'invention concerne également les enzymes C2GnT3 et des dérivés à activité C2GnT3 de ces derniers, en particulier des dérivés solubles comprenant le domaine d'activité catalytique de C2GnT3. L'invention concerne en outre des procédés permettant de produire des saccharides, des glycopeptides ou des glycoprotéines 1,6-N-acétyl-glucosaminyle-glycosylés, en utilisant une protéine C2GnT3 ou une protéine hybride de celle-ci, ou en utilisant des cellules transfectées de manière stable avec un vecteur qui contient l'ADN codant pour une protéine C2GnT3 à activité enzymatique, en tant que système d'expression pour la production recombinante de ces glycopeptides ou glycoprotéines. L'invention concerne par ailleurs des procédés permettant d'identifier des agents capables d'inhiber ou de stimuler l'activité biologique de C2GnT3, ainsi que des procédés consistant à utiliser la C2GnT3 pour la conception structurelle d'inhibiteurs ou de stimulants de celle-ci. L'invention concerne enfin un procédé permettant d'identifier les variations des séquences d'ADN dans le gène C2GnT3, consistant à isoler l'ADN d'un patient, à amplifier les exons codants de C2GnT3 au moyen d'une PCR, puis à détecter de la présence d'une variation de la séquence d'ADN.

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