C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2361654
The present invention provides a method for detecting methylated nucleic acids comprising the steps of: 1) contacting a nucleic acid sample suspected of containing methylated nucleotides with an oligonucleotide sequence under suitable conditions for nucleic acid hybridization, said oligonucleotide sequence characterised in that, (i) it comprises a first stem labeled with a fluorophore moiety, a loop sequence having a region of nucleotides complementary to at least a region of the nucleic acid sample, which region is susceptible to methylation, and a second stem labeled with a quencher moiety that is capable of quenching the fluorophore moiety when in spatial proximity to the fluorophore moiety; and (ii) the nucleotides forming the first stem are capable of moving into spatial proximity with the nucleotides forming the second stem when the probe is dissociated from the nucleic acid sample; 2) altering the hybridization conditions such that the oligonucleotide probe dissociates from unmethylated DNA but remains hybridized to methylated DNA; and 3) measuring the change in fluorescence.
L'invention concerne un procédé de détection d'acides nucléiques méthylés consistant à 1) mettre un échantillon d'acides nucléiques supposé contenir des nucléotides méthylés en contact avec une séquence oligonucléotidique dans des conditions convenant à l'hybridation d'acides nucléiques, ladite séquence étant caractérisée en ce que (I) elle comprend une première tige étiquetée avec un groupe caractéristique fluorophore, une séquence en boucle ayant une région de nucléotides complémentaire à au moins une région de l'échantillon d'acides nucléiques, laquelle région peut être méthylée et une seconde tige marquée d'un groupe caractéristique d'extinction capable d'éteindre le groupe caractéristique fluorophore lorsqu'il se trouve à proximité spatiale du groupe fluorophore et (ii) les nucléotides formant la première tige sont capables de se rapprocher physiquement des nucléotides formant la seconde tige lorsque la sonde est dissociée de l'échantillon d'acide nucléique ; 2) à modifier les conditions d'hybridation de manière que la sonde oligonucléotidique soit dissociée de l'ADN tout en restant hybridée à l'ADN méthylé et 3) à mesurer la variation de fluorescence.
Epigenomics Ag
Mbm Intellectual Property Law Llp
The University Of Western Australia
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1716761