C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/53 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01)
Patent
CA 2252412
A method for the production of transgenic plants is provided in which a vector carrying a gene encoding the green fluorescent protein is introduced into cells, the cells are screened for the protein and transformed cells are selected and regenerated. The cellular toxicity of the green fluorescent protein is circumvented by regulating expression of the gene encoding the protein or directing the protein to a subcellular compartment where it is not toxic to the cell. DNA constructs are provided for cell transformation in which the expression of a gene encoding the green fluorescent protein is placed under the control of an inducible promoter. In addition, DNA constructs are provided in which a nucleotide sequence encoding the green fluorescent protein is operably linked to a signal sequence which directs the expressed protein to a subcellular compartment where the protein is not toxic to the cell. Oxidative stress to plant cells transformed with GFP also can be ameliorated by transforming cells with an expression vector comprising genes encoding GFP and an oxygen scavenger enzyme such as superoxide dismutase. The toxicity of GFP in transformed plants can be eliminated by excising the screenable marker gene following detection of transformed cells or sectors. The FLP/FRT system is used in conjunction with GFP as a visible marker for transformation and FRT excision. A nucleotide sequence optimized for expression of the green fluorescent protein in plants is also provided.
Cette invention se rapporte à un procédé pour la production de plantes transgéniques, dans lequel un vecteur portant un gène codant la protéine fluorescente verte (PFG) est introduit dans des cellules, ces cellules sont criblées en fonction de la présence de cette protéine et les cellules transformées sont ensuite sélectionnées et régénérées. On évite la toxicité cellulaire de la protéine fluorescente verte en régulant l'expression du gène codant cette protéine ou en dirigeant cette protéine dans un compartiment sous-cellulaire où elle n'est pas toxique pour la cellule. On prévoit pour la transformation cellulaire des produits de synthèse d'ADN, dans lesquels l'expression d'un gène codant la protéine fluorescente verte est placée sous le contrôle d'un promoteur inductible. On prévoit en outre des produits de synthèse d'ADN, dans lesquels une séquence nucléotidique codant la protéine fluorescente verte est liée fonctionnellement à une séquence de signaux qui dirige la protéine exprimée dans un compartiment sous-cellulaire où la protéine n'est pas toxique pour la cellule. On peut également réduire les contraintes oxydatives s'exerçant sur les cellules végétales transformées avec la PFG, en transformant des cellules avec un vecteur d'expression comprenant des gènes codant la PFG et une enzyme désoxygénante comme la superoxyde-dismutase. On peut éliminer la toxicité de la PFG dans les plantes transformées en excisant le gène marqueur criblable après détection des cellules ou des secteurs transformés. Le système FLP/FRT est utilisé en conjonction avec la PFG comme marqueur visible pour la transformation et l'excision FRT. Une séquence nucléotidique optimisée pour l'expression de la protéine fluorescente verte dans des plantes est également présentée.
Bidney Dennis
Bowen Benjamin
Gordon-Kamm William
Miller Mike
Pierce Dorothy A.
Pioneer Hi-Bred International Inc.
Torys Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1454527