C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/82 (2006.01) A01H 1/04 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2502657
A method for the production of transgenic plants is provided in which a vector carrying a gene encoding the green fluorescent protein is introduced into cells, the cells are screened for the protein and transformed cells are selected and regenerated. The cellular toxicity of the green fluorescent protein is circumvented by regulating expression of the gene encoding the protein or directing the protein to a subcellular compartment where it is not toxic to the cell. DNA constructs are provided for cell transformation in which the expression of a gene encoding the green fluorescent protein is placed under the control of an inducible promoter. In addition, DNA constructs are provided in which a nucleotide sequence encoding the green fluorescent protein is operably linked to a signal sequence which directs the expressed protein to a subcellular compartment where the protein is not toxic to the cell. Oxidative stress to plant cells transformed with GFP also can be ameliorated by transforming cells with an expression vector comprising genes encoding GFP and an oxygen scavenger enzyme such as superoxide dismutase. The toxicity of GFP in transformed plants can be eliminated by excising the screenable marker gene following detection of transformed cells or sectors. The FLP/FRT system is used in conjunction with GFP as a visible marker for transformation and FRT excision. A nucleotide sequence optimized for expression of the green fluorescent protein in plants is also provided.
L'invention concerne une méthode de production de plantes transgéniques consistant à introduire dans des cellules un vecteur portant un gène codant la protéine fluorescente verte (GFP), à cribler les cellules quant à la présence de cette protéine ainsi qu'à sélectionner et régénérer les cellules transformées. La toxicité cellulaire de la GFP est évitée par une régulation de l'expression du gène codant la protéine ou par une direction de la protéine vers un compartiment subcellulaire où elle n'est pas toxique pour la cellule. L'invention comprend des constructions d'ADN permettant de transformer les cellules de manière à ce qu'un promoteur inductible contrôle l'expression du gène codant la GFP. L'invention comprend également des constructions d'ADN faisant en sorte qu'une séquence nucléotidique codant la GFP soit fonctionnellement liée à une séquence-signal dirigeant la protéine issue de l'expression génique vers un compartiment subcellulaire où elle n'est pas toxique pour la cellule. De plus, le stress oxydatif causé par la GFP dans les cellules transformées peut être atténué par l'utilisation d'un vecteur d'expression comprenant à la fois le gène codant la GFP et celui codant une enzyme désoxygénante telle que la superoxyde dismutase. La toxicité de la GFP pour la plante transformée peut être éliminée par une excision du gène marqueur, repérable par criblage, après détection des cellules ou secteurs transformés. Le système FLP/FRT est utilisé en combinaison avec la GFP comme marqueur visible pour la transformation et pour l'excision de la cible FRT. L'invention comprend enfin une séquence nucléotidique optimisée pour l'expression de la GFP chez la plante.
Bidney Dennis
Bowen Benjamin
Gordon-Kamm William
Miller Mike
Pierce Dorothy
Pioneer Hi-Bred International Inc.
Torys Llp
LandOfFree
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