C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/31 (2006.01) C07K 14/37 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2376058
The invention relates to the use of the regulatory subunit (R) of the cAMP dependent protein kinase (PKA) from Dictyostelium discoideum for cAMP detection. It includes constructs for expression of the R-subunit in E. coli and fusion to green fluorescent proteins (GFP). Fluorescence energy transfer is used as a way to monitor cAMP binding, either by using fluorescently labelled cAMP or cGMP, or by using mutant GFPs with modified absorption and emission spectra. FRET changes upon cAMP binding will allow measurement of cAMP level either in vitro or within living cells.
La présente invention concerne l'utilisation de la sous-unité de régulation (R) de la protéine kinase (PKA) dépendante de l'AMPc obtenue à partir de Dictyostelium discoideum, en vue de la détection de l'AMPc. Celle-ci implique des produits recombinés destinés à l'expression de la sous-unité R dans E. coli et la fusion pour obtenir des protéines à fluorescence verte (GFP). Le transfert d'énergie de fluorescence est utilisé comme moyen de surveillance de l'AMPc, soit en utilisant des AMPc ou des GMPc marqués par fluorescence, soit en utilisant des GFP mutantes avec absorption modifiée et spectre d'émission. Les changements du FRET suite à la liaison de l'AMPc permettent de mesurer le taux d'AMPc$iin vitroou dans des cellules vivantes.
Fetherstonhaugh & Co.
Rmf Dictagene S.a.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1897967