Variant loxp sequences and application of the same

Details Variant loxp sequences and application of the same Variant loxp sequences and application of the same

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/66 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01)

Patent

CA 2309386

Variant loxP sequences having the characteristics (a) to (c) as specified below whereby gene insertion or gene substitution can be effected at a high efficiency in higher eucaryotic cells such as animal cells: (a) having a sequence derived from the following wild type loxP sequence originating in a coliphage P1 by substitution of at least one of the bases at the 2-, 3-, 4- and 5-positions (i.e., T, G, T and A, respectively) and at least one of the bases at the 6- and 7-positions (i.e., T and G, respectively) in the central eight bases (the spacer region) each by a different base optionally with substitution of base(s) in the regions other than the spacer region by arbitrary base(s): 12345678 5'-ATAACTTCGTATA <u>ATGTATGC</u> TATACGAAGTTAT-3' SPACER REGION; (b) not undergoing specific DNA recombination with the wild type loxP sequence even in the presence of a recombinase Cre; and (c) undergoing specific DNA recombination with another variant loxP sequence having the same sequence in the presence of the recombinase Cre.

L'invention porte sur des séquences 1oxP de variant ayant les caractéristiques (a) à (c) spécifiées ci-après, et dans lesquelles il est possible d'effectuer l'insertion ou la substitution d'un gène avec une haute efficacité dans des cellules eucaryotes telles que des cellules d'animaux: (a) ces cellules ont une séquence dérivée de la séquence 1oxP de génotype sauvage originaire d'un coliphage P1 par substitution d'au moins une des bases aux positions 2, 3, 4 et 5 (c'est-à-dire T, G, T et A respectivement) et d'au moins une des bases aux positions 6 et 7 (c'est-à-dire T et G, respectivement) dans les huit bases centrales (la région espaceur), et chacune par une base différente éventuellement par substitution de base (s) dans les régions autres que la région espaceur par des bases arbitraires: 12345678 REGION ESPACEUR 5'-ATAACTTCGTATA <u>ATGTATGC</u> TATACGAAGTTAT-3'; (b) ces cellules ne subissent pas la recombinaison de l'ADN spécifique avec la séquence 1oxP de génotype sauvage même en présence d'une recombinase Cre; et (c) ces cellules ne subissent pas la recombinaison d'ADN spécifique avec une autre séquence 1oxP de variant ayant la même séquence en présence de la recombinase Cre.

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