C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/37 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01)
Patent
CA 2478815
This invention provides a non-radioactive assay to monitor and quantify the target-cell killing activities mediated by cytotoxic T lymphocytes (CTLs). This assay is predicated on the discovery that apoptosis pathway activation and, in particular, caspase activity, provides a measure of cytotoxic effector cell activity. In one embodiment, measurement of CTL-induced caspase activation in target cells is achieved through detection of the specific cleavage of fluorogenic caspase substrates. This assay reliably detects antigen-specific CTL killing of target cells, and provides a more sensitive, more informative and safer alternative to the standard 51Cr-release assay most often used to quantify CTL responses. The assay can be used to study CTL- mediated killing of primary host target cells of different cell lineages, and enables the study of antigen-specific cellular immune responses in real time at the single-cell level. As such, the assay can provide a valuable tool for studies of infectious disease pathogenesis and development of new vaccines and immunotherapies.
L'invention concerne un essai non radioactif pour le contrôle et la quantification des activités tueuses de cellules cibles dont la médiation est assurée par des lymphocytes T cytotoxiques (CTL). Cet essai repose sur la constatation suivante: l'activation du trajet de l'apoptose, et en particulier l'activité de la caspase, donne une indication sur l'activité cytotoxique des cellules effectrices. Selon une variante, on mesure l'activation de la caspase induite par CTL dans les cellules cibles en décelant le clivage spécifique de substrats fluorogéniques de la caspase. L'essai considéré détecte de manière fiable l'élimination de cellules cibles par CTL spécifique à l'antigène et constitue une variante plus sensible, plus riche en informations et plus sûre que l'essai type de mesure de libération de <51>Cr le plus souvent utilisé pour quantifier les réponses de CTL. On peut utiliser l'essai en question pour étudier l'élimination à médiation par CTL des cellules cibles primaires de l'hôte, de différentes lignées cellulaires, et pour étudier les réponses immunitaires cellulaires spécifiques à l'antigène, en temps réel, au niveau d'une cellule unique. En tant que tel, l'essai considéré peut constituer un outil précieux dans les études relatives à la pathogenèse des maladies infectieuses et à l'élaboration de nouveaux vaccins et de nouvelles immunothérapies.
Brown Martin J.
Chahroudi Ann
Feinberg Mark
Komoriya Akira
Liu Luzheng
Fetherstonhaugh & Co.
Oncoimmunin Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1949507