Whole cell and cell-debris free polysaccharide

Details Whole cell and cell-debris free polysaccharide Whole cell and cell-debris free polysaccharide

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 19/04 (2006.01) C07H 1/00 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01)

Patent

CA 2407313

The present invention provides for a method for obtaining a polysaccharide substantially free from whole bacterial cells and bacterial cell debris including: (a) fermenting a Sphingomonas bacterium, which produces the polysaccharide, to produce an aqueous fermentation broth having the polysaccharide dissolved therein; (b) diluting the fermentation broth with an equal volume of deionized water; (c) partially hydrolyzing the polysaccharide by exposing the fermentation broth resulting from step (b) to a temperature in excess of 100 ~C for a time period from about ten minutes to about one hour; (d) removing bacterial cells from the polysaccharide by centrifugation of the fermentation broth and recovery of a supernatant aqueous liquid; (e) precipitating the polysaccharide from the supernatant aqueous liquid by adding a second liquid to the supernatant aqueous liquid, wherein the second liquid is miscible with water, non-reactive with the polysaccharide, and in which the polysaccharide is substantially insoluble; and (f) harvesting the polysaccharide resulting from step (e) by separating it from the supernatant aqueous liquid.

Cette invention a trait à un procédé permettant d'obtenir un polysaccharide quasiment exempt de cellules entières bactériennes ou de débris cellulaires bactériens. Ce procédé consiste à faire fermenter une bactérie de Sphingomonas, produisant le polysaccharide, et ce, afin d'obtenir un bouillon de culture de fermentation aqueux dans lequel est dissous le polysaccharide, à diluer ce bouillon de culture avec un même volume d'eau déionisée, à hydrolyser partiellement le polysaccharide en soumettant le bouillon de culture obtenu dans la phase deux aux effets d'une température dépassant 100 ·C et ce, durant un laps de temps compris entre dix minutes et une heure environ, à séparer dans le bouillon de culture les cellules bactériennes présentes du polysaccharide par centrifugation, à récupérer un liquide aqueux surnageant, à faire précipiter le polysaccharide présent du liquide aqueux surnageant par adjonction d'un second liquide. Ce second liquide peut se mélanger à de l'eau et ne réagit pas avec le polysaccharide, lequel est quasiment insoluble dans ledit liquide. La dernière opération consiste à recueillir le polysaccharide obtenu au cours de la cinquième opération et ce, par séparation du liquide aqueux surnageant.

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