Zymogenic protease precursors that can be autocatalytically...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/57 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 9/64 (2006.01) C12N 9/76 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01)

Patent

CA 2301698

A process for the recombinant production of a protease is characterised by (a) transformation of a host cell with a recombinant nucleic acid which codes for a zymogenic protease precursor containing an autocatalytic cleavage site which does not occur naturally, this cleavage site being recognised by the active form of said protease, cleaving the zymogenic precursor into the active protease; (b) cultivation of the host cell such that the zymogenic protease precursor is created in the host cell in the form of inclusion bodies; (c) isolation and naturalisation of the inclusion bodies in such conditions that the protease part of the zymogenic precursor is produced with its natural conformation; and (d) autocatalytic cleavage of the naturalised zymogenic precursor to produce the active protease. This process is suitable to produce recombinant proteases in a simple manner and with high yields.

L'invention concerne un procédé de préparation recombinée de protéase, qui se caractérise par a) la transformation d'une cellule hôte avec un acide nucléique recombiné codant un précurseur zymogène d'une protéase contenant un site de coupure autocatalytique qui n'apparaît pas naturellement. Ce site de coupure est identifié par la forme active de la protéase citée et le précurseur est alors coupé pour donner lieu à la protéase active; b) mise en culture de la cellule hôte de manière que le précurseur zymogène de la protéase figure sous forme de corps d'inclusion dans la cellule hôte; c) par isolement desdits corps d'inclusion et par retour à l'état naturel dans des conditions où la partie de protéase du précurseur zymogène apparaît dans sa conformation naturelle et d) par séparation par voie autocatalytique du précurseur zymogène revenu à l'état naturel, pour donner lieu à la protéase active. Ce procédé s'utilise pour préparer de manière simple des quantités importantes de protéases recombinées.

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