C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 19/00 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/567 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)
Patent
CA 2607015
An intramolecular bioluminescence resonance energy transfer (BRET), biosensor for monitoring receptor activity and signalling cascades is disclosed. The ~double-brilliance~ biosensor sandwiches .beta.-arrestin (.beta.-arr) between Renilla luciferase (Luc) and the yellow fluorescent protein (YFP). .beta.-arr associates with G-protein coupled receptors GPCR following receptor activativation, bringing Luc and YPF into close proximity that favours energy transfer. In addition to providing new insights into the agonist-induced conformational rearrangements of .beta.-arr in living cells, the double- brilliance .beta.-arr offers a universal biosensor for GPCR activation, allowing the study of native receptors in large-scale screening analysis. The activity of other signalling molecules known to interact with .beta. arrestin could also be monitored by double brilliance .beta. arr.
La présente invention concerne un biocapteur a transfert d'énergie de résonance à bioluminescence intramoléculaire (BRET) conçu pour contrôler une activité de récepteur et des cascades de signalisation. Le biocapteur <= double brillance >= prend en sandwich la .beta.-arrestine (.beta.-arr) entre Renilla luciferase (Luc) et une protéine fluorescente jaune (YFP). .beta.-arr s'associe à des récepteurs couplés à la protéine G (GPCR) après activation des récepteurs, amenant Luc et YFP à proximité immédiate, ce qui favorise le transfert d'énergie. En plus d'offrir de nouvelles connaissances approfondies des réarrangements de conformation de .beta.-arr dans des cellules vivantes, la .beta.-arr double brillance constitue un biocapteur universel pour l'activation de GPCR, ce qui permet l'étude de récepteurs natifs dans le cadre d'analyses de criblage à grande échelle. L'activité d'autres molécules de signalisation connues pour interagir avec la .beta.-arrestine peut également être contrôlée par la .beta.-arr double brillance.
Bouvier Michel
Charest Pascale
Borden Ladner Gervais Llp
Universite de Montreal
LandOfFree
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