In situ hybridization slide processes

Details In situ hybridization slide processes In situ hybridization slide processes

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) G02B 21/34 (2006.01)

Patent

CA 2282702

A method, as shown in the figure, of preparing fluorescent in situ hybridization slides, comprising: providing a slide with a raised ring thereon; providing to the slide a DNA probe; providing to the slide cells and target DNA; providing to the slide a formamide-free mixture of 10 % +/- 2 % by weight dextran sulfate, and 15 %-25 % glycerol and 0.9 % by weight salt or a solution of 10 % +/- 2 % by weight dextran sulfate, 10-30 % by volume formamide and 0.9 % by weight salt; placing a coverglass on the ring; denaturing and hybridizing the slide; and performing a post-hybridization wash of the slide.

L'invention concerne un procédé illustré en figure 1, de préparation de lames porte-objet fluorescentes pour hybridation in situ. Ce procédé consiste à préparer une lame porte-objet avec un anneau surélevé sur cette dernière, placer une sonde d'ADN sur cette dernière, placer ensuite des cellules et un ADN cible sur cette lame, puis déposer sur cette dernière un mélange dépourvu d'amide formique, de 10 % +/- 2 % en poids de sulfate de dextran, et de 15 %-25 % de glycérol et 0,9 % en poids de sel ou une solution de 10 % +/-2 % en poids de sulfate de dextran, 10-30 % par volume d'amide formique et 0,9 % en poids de sel, et enfin, à placer une lamelle couvre-objet sur l'anneau. Le procédé consiste ensuite à assurer la dénaturation et l'hybridation de la lame, puis à laver cette dernière une fois l'hybridation réalisée;

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