C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2213240
A probe for detecting nonradioactive nucleic acids by the hybridization technique, and a highly sensitive and highly selective method for the detection. The probe comprises a set of two or more oligonucleotide probes that can hybridize perfectly complementarily with the specific portion of the sequence of the consecutive bases of the target nucleic acid, each oligonucleotide probe being labeled at the 5' or 3' end thereof with a chromophoric group having a suitable spatial arrangement so that adjacent chromophoric groups can yield an excimer or the like when each probe hybridizes with the target nucleic acid. More specifically, although the probe of the invention comprises a set of two or more labeled probes and the labeling groups to be detected are present each on a different probe, the labeling groups take such a spatial arrangement that the two chromophoric groups present on the two probes which have come to exist adjacent to each other only after the hybridization with the target nucleic acid induce unique phenomena such as excimer fluorescence, thereby enabling the target nucleic acid to be detected with a high recognizability. Thus the probe of the invention enables the erroneous recognition which has been problematic heretofore to be reduced remarkably and the types of utilizable labeling groups to be varied widely. Further it is possible to improve the detection sensitivity remarkably because it is possible to reduce the background noise remarkably. In addition, it is possible to discriminate a number of (single- base variation) nucleic acids that are different from one another in only one base present at a specific position to be detected, which has been difficult heretofore.
La présente invention concerne une sonde de détection des acides nucléiques non radioactifs utilisant une technique d'hybridation. L'invention concerne également un procédé de détection ultrasensibles et ultrasélectif. La sonde se compose d'un ensemble d'au moins deux sondes oligonucléotides pouvant s'hybrider en parfaite complémentarité avec la partie spécifique de la séquence des bases consécutives de l'acide nucléique cible. En l'occurrence, chaque sonde oligonucléotide est marquée à son extrémité 5' ou 3' par un groupe chromophore présentant un agencement tridimensionnel tel que les groupes chromophores adjacents peuvent produire un excimère ou similaire lorsque chaque sonde s'hybride avec l'acide nucléique cible. De façon plus spécifique, alors que la sonde de l'invention est constituée d'un ensemble d'au moins deux sondes marquées et que les groupes marqueurs à détecter sont présents chacun sur une sonde différente, les groupes marqueurs respectent un agencement tridimensionnel tel que les deux groupes chromophores présents sur les deux sondes (dont il s'avère qu'ils ne se trouvent en positions adjacentes qu'après l'hybridation avec l'acide nucléique cible) induisent des phénomènes uniques tels que la fluorescence de l'excimère, ce qui permet la détection de l'acide nucléique cible avec une aptitude élevée à l'identification. Il en résulte que la sonde de la présente invention permet, d'une part de réduire considérablement le taux d'erreurs d'identification qui jusqu'à présent posait encore problème, et d'autre part de varier amplement les types de groupes marqueurs utilisables. En outre, l'invention permet d'améliorer de façon remarquable la sensibilité de détection car il est possible d'atténuer fortement le bruit de fond. En outre, il est possible de discriminer un nombre d'acides nucléiques (d'une variation d'une seule base) qui est différent de l'une à l'autre au niveau d'une seule base présente en une position spécifique à détecter, ce qui était difficile jusqu'à présent.
Ebata Katsuyoshi
Masuko Masayuki
Fetherstonhaugh & Co.
Hamamatsu Photonics K.k.
The Society For Techno-Innovation Of Agriculture Foresty And Fisheries
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1356234