C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/505 (2006.01)
Patent
CA 2466627
The invention provides a method for recovering and purifying recombinant human erythropoietin (rhEpo) from a cell culture medium comprising host cells, which method comprises the steps of: (a) removing host cells, cellular constituents and debris from the cell culture medium by centrifugation using a disc stack separator followed by a depeth filtration step to obtain a clarified culture medium supernatant; (b) adjusting the conductivity of the supernatant to 5 mS/cm or less, and a pH of between about 7.0 and 8.0; (c) applying the supernatant from step (b) to a column comprising an anion exchange chromatographic medium, washing the column, eluting the rhEpo from the column, and collecting the peak fraction (s) that contain rhEpo; (d) subjecting the combined peak fractions from step (c) to a reverse phase chromatography step using a polystyrene resin that can be run under medium pressure (< 10 bar) and is resistance to high concentrations of NaOH, such as Source 30RPC, the rhEpo being eluted using a linear gradient of an organic solvent; (e) applying one or more fractions eluted in step (d) which contain rhEpo to a column comprising Q-Seph HP anion exchange chromatographic media, washing the column, and eluting the rhEpo using a linear salt gradient; (f) selecting one or more fractions eluted in step (e) which contain rhEpo based on degree of sialylation of the rhEpo; and (g) subjecting one or more fractions eluted in step (f) which contain rhEpo by one or more size exclusion chromatographic steps using Superdex 75 prep grade to remove potential dimers and higher aggregates; and collecting the eluate containing rhEpo.
L'invention concerne un procédé de récupération et de purification d'érythropoïétine humaine recombinée (rhEpo) dans un milieu de culture cellulaire contenant des cellules hôtes, lequel procédé comprend les étapes consistant: (a) à extraire les cellules hôtes, les constituants cellulaires et les débris du milieu de culture cellulaire par centrifugation à l'aide d'un séparateur à pile de disques suivie d'une étape de filtration en profondeur afin d'obtenir un surnageant de milieu de culture clarifié; (b) à ajuster la conductivité du surnageant à 5mS/cm ou moins, et un pH compris entre environ 7,0 et 8, 0; (c) à appliquer le surnageant de l'étape (b) à une colonne comprenant un milieu chromatographique d'échange d'anions, à laver la colonne, à éluer la rhEpo de la colonne, et à collecter les fractions de crête contenant la rhEpo; (d) à soumette les fractions de crête combinées de l'étape (c) à une étape de chromatographie en phase inverse à l'aide d'une résine de polystyrène pouvant être exécutée sous une pression moyenne (< 10 bar) et résistant aux hautes concentrations de NaOH, telles que la Source 30RPC, la rhEpo étant éluée à l'aide d'un gradient linéaire d'un solvant organique; (e) à appliquer une ou plusieurs fractions éluées dans l'étape (d) lesquelles contiennent rhEpo dans une colonne contenant des milieux chromatographiques d'échange d'anions Q-Seph HP, à laver la colonne, et à éluer la rhEpo à l'aide d'un gradient de sel linéaire; (f) à sélectionner une ou plusieurs fractions éluées dans l'étape (e) qui contiennent la rhEpo sur la base d'un degré de sialylation de la rhEpo; et (g) à soumettre une ou plusieurs fractions éluées dans l'étape (f) qui contiennent rhEpo par une ou plusieurs étapes chromatographiques d'exclusion de taille à l'aide de Superdex75 de qualité prep pour éliminer les dimères potentiels et des agrégats supérieurs; et à collecter l'éluat contenant la rhEpo.
Alliger Peter
Palma Norbert
Fetherstonhaugh & Co.
Sandoz Ag
Sandoz Gmbh
LandOfFree
Chromatographic purification of recombinant human... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Chromatographic purification of recombinant human..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Chromatographic purification of recombinant human... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1393383