C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/00 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01)
Patent
CA 2437498
This invention relates to methods an kits for determining the level of H2O2 inside a cell, an for determining whether a test compound has ability to scavenge a reactive oxygen species (ROS). The methods an diagnostic kits of this invention employ a cell containing a promoter which is inducible by an ROS, such as the H2O2-inducible KatA promoter of Agrobacterium tumefacines; the promoter is used to drive expression of a reporter gene. The expression level of the reporter gene correlates with the level of ROS, specifically H2O2, inside the cell. When the cell is exposed to a test compound, either intra-cellularly or extra-cellularly, if the level of ROS-inducible expression of the reporter is reduced, then this indicates that the test compound is a scavenger of the ROS. The methods of this invention may also be used to select for new or improved ROS scavengers by expressing a library of test scavengers in cells which express a reporter from a ROS-inducible promoter and selecting for those cells whose level of ROS-inducible expression of the reporter is reduced. The cells which express a reporter from a ROS-inducible promoter may have a modified genetic background to reduce their naturally occurring ROS- scavenging ability.
L'invention concerne des procédés et des kits permettant de déterminer le niveau de H¿2?O¿2? dans une cellule, et de déterminer si un composé test est apte à capter une espèce d'oxygène réactive (ROS). Les procédés et kits de diagnostic de l'invention utilisent une cellule contenant un promoteur qui est inductible par une espèce d'oxygène réactive, tel que le promoteur de Agrobacterium tumefacines inductible par H¿2?O¿2?, ce promoteur permettant de conduire l'expression d'un gène rapporteur. Le niveau d'expression du gène rapporteur est lié au niveau d'espèces d'oxygène réactives, notamment de H¿2?O¿2?, dans la cellule. Lorsque la cellule est soumise au composé test, de manière intra-cellulaire ou extra-cellulaire, un niveau d'expression réduit du rapporteur, inductible par l'espèce d'oxygène réactive, indique que le composé test est un capteur de l'espèce d'oxygène réactive. Les procédés de cette invention peuvent également servir à sélectionner des capteurs d'espèces d'oxygène réactives, nouveaux ou améliorés, par expression d'une banque de capteurs test dans des cellules qui expriment un rapporteur à partir d'un promoteur, inductible par l'espèce d'oxygène réactive, et à sélectionner pour ces cellules dont le niveau d'expression du rapporteur, inductible par l'espèce d'oxygène réactive, est réduit. Les cellules qui expriment un rapporteur du promoteur inductible par l'espèce d'oxygène réactive peuvent avoir un fond génétiquement modifié pour réduire leur aptitude naturelle à capter des espèces d'oxygène réactives.
Pan Shen Quan
Smart & Biggar
LandOfFree
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