C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)
Patent
CA 2401320
A method is provided for producing a library of mutagenized polynucleotides from a target sequence comprising (a) taking a sample comprising: (i) a target sequence including a section to be mutagenized, (ii) a library of first primers where the first primers include a first fixed sequence and a first unknown sequence 3' to the first fixed sequence, the first unknown sequence varying within the library of first primers, and (iii) a library of second primers where the second primer include a second fixed sequence that differs from the first fixed sequence, and a second unknown sequence 3' to the second fixed sequence, the second unknown sequence varying within the library of second primers; (b) performing one or more cycles of primer extension amplification on the sample in the presence of at least one polymerase such that a member of the library of the first primers is extended relative to the first primer that was extended in step (b) to form the library of mutagenized polynucleotides. The mutagenesis produces a library of mutagenized targeted sequences with random truncations.
L'invention concerne un procédé générant une bibliothèque de polynucléotides mutagénisés à partir d'une séquence cible. Ce procédé consiste à (a) prendre un échantillon mutagénisé comprenant (ii) une bibliothèque de premières amorces dans lesquelles les premières amorces comportent une première séquence fixe et une première séquence inconnue (3') de la première séquence fixe, la première séquence inconnue variant au sein de la bibliothèque de premières amorces, et comprenant aussi (iii) une bibliothèque de secondes amorces où la seconde amorce inclut une seconde séquence fixe, différente de la première séquence fixe, et une seconde séquence inconnue (3') de la seconde séquence fixe. La seconde séquence inconnue varie au sein de la bibliothèque de secondes amorces; le procédé consiste également (b) à réaliser un ou plusieurs cycles d'amplification de l'extension de l'amorce sur l'échantillon en présence, d'au moins, une polymérase de manière à ce qu'un élément de la bibliothèque des premières amorces soit étendu par rapport à la séquence cible ; (c) à réaliser un ou plusieurs cycles supplémentaires d'amplification d'extension d'amorce sur l'échantillon, de manière à ce que l'élément de la bibliothèque des secondes amorces soit étendu par rapport à la première amorce, qui a été étendue lors de la phase (b), en vue de former une bibliothèque de polynucléotides mutagénisés. La mutagénèse permet de produire la bibliothèque de séquences ciblées mutagénisées présentant des troncatures aléatoires.
Lietz Eric
Borden Ladner Gervais Llp
Genopsys Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1500341