C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/08 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C12N 1/18 (2006.01) C12N 5/06 (2006.01) C12N 5/08 (2006.01)
Patent
CA 2615983
Disclosed are useful constructs and methods for the expression of proteins using primary translation products that are processed within a recombinant host cell. Constructs comprising a single open reading frame (sORF) are described for protein expression including expression of multiple polypeptides. A primary translation product (a pro-protein or a polyprotein) contains polypeptides such as inteins or hedgehog family auto-processing domains, or variants thereof, inserted in frame between multiple protein subunits of interest. The primary product can also contain cleavage sequences such as other proteolytic cleavage or protease recognition sites, or signal peptides which contain recognition sequences for signal peptidases, separating at least two of the multiple protein subunits. The sequences of the inserted auto-processing polypeptides or cleavage sites can be manipulated to enhance the efficiency of expression of the separate multiple protein subunits. Also disclosed are independent aspects of conducting efficient expression, secretion, and/or multimeric assembly of proteins such as immunoglobulins. Where the polyprotein contains immunoglobulin heavy and light chain segments or fragments capable of antigen recognition, in an embodiment a selectable stoichiometric ratio is at least two copies of a light chain segment per heavy chain segment, with the result that the production of properly folded and assembled functional antibody is made. Modified signal peptides, including such from immunoglobulin light chains, are described.
L'invention concerne des constructions et des méthodes utiles pour exprimer des protéines à l'aide de produits de translation primaires traités à l'intérieur d'une cellule hôte recombinante. Les constructions de l'invention comprennent une trame de lecture ouverte unique (sORF) et sont décrites pour une expression protéinique qui comprend l'expression de plusieurs polypeptides. Un produit de translation primaire (une pro-protéine ou une polyprotéine) contient des polypeptides, notamment des intéines ou des domaines d'autotraitement de la famille "hedgehod" ou des variants de ceux-ci, insérés dans la trame entre plusieurs sous-unités protéiniques à examiner. Le produit primaire de l'invention peut également contenir des séquences de clivage, notamment d'autres sites de reconnaissance de protéases ou de clivage protéolytique, ou des peptides de signal contenant des séquences de reconnaissance de peptidases de signal séparant au moins deux sous-unités protéiniques. Les séquences des polypeptides d'autotraitement insérés ou des sites de clivage susmentionnés peuvent être manipulées pour améliorer l'efficacité d'expression des sous-unités protéiniques séparées. Des aspects indépendants de l'invention consistent à réaliser une expression, une sécrétion et/ou un assemblage multimère efficaces de protéines, notamment des immunoglobulines. Lorsque la polyprotéine contient des segments de chaînes lourdes et de chaînes légères d'immunoglobulines, ou des fragments permettant une reconnaissance d'antigènes, dans un mode de réalisation, un rapport stoïchiométrique sélectionnable est constitué d'au moins deux copies d'un segment de chaîne légère par segment de chaîne lourde, il en résulte la production d'un anticorps fonctionnel correctement plié et assemblé. L'invention concerne également des peptides de signal modifiés, comprenant de telles chaînes légères d'immunoglobulines.
Carson Gerald R.
Gion Wendy
Gu Jijie
Kunes Yune
Regier Dean A.
Abbott Laboratories
Torys Llp
LandOfFree
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