Assay for disease related conformation of a protein

Details Assay for disease related conformation of a protein Assay for disease related conformation of a protein

G - Physics

01

N

G01N 33/68 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)

Patent

CA 2344853

An assay method is disclosed which isolates and detects the presence of a disease related conformation of a protein (e.g., PrPSc) present in a sample also containing the non-disease related conformation of the protein (e.g., PrPC). The sample is treated (e.g., contacted with protease) in a manner which hydrolyzes the disease related conformation and not the non-disease related conformation. The treated sample is contacted with a binding partner (e.g., a labeled antibody which binds PrPSc) and the occurrence of binding provides an indication that PrPSc is present. Alternatively the PrPSc of the treated sample is denatured (e.g., contacted with guanadine) or unfolded. The unfolded PrPSc is contacted with a binding partner and the occurrence of binding indicates the presence of PrPSc in the sample. In another embodiment, PrPSc and PrPC are reacted with a labeled antibody that binds both conformations and a conformation that binds only the disease related conformation, and the presence of the disease related conformation is determined by comparing the two.

L'invention porte sur un procédé d'essai permettant d'isoler et de détecter la présence d'une conformation de protéine (par exemple, PrP?Sc¿) liée à une maladie présente dans un échantillon contenant en outre une conformation de protéine (par exemple, PrP?Sc¿) non liée à une maladie (par exemple, PrP?C¿). L'échantillon est traité (par exemple, par contact avec une protéase) de manière à hydrolyser la conformation liée à la maladie et non la conformation non liée à la maladie. L'échantillon ainsi traité est mis en contact avec un partenaire de liaison (par exemple, un anticorps marqué se fixant au PrP?Sc¿), la survenance d'une liaison donnant une indication de la présence du PrP?Sc¿. En variante, le PrP?Sc¿ de l'échantillon traité est dénaturé (par exemple, par contact avec de la guanadine) ou déplié. Le PrP?Sc¿ déplié est mis en contact avec un partenaire de liaison, la survenance d'une liaison donnant une indication de la présence du PrP?Sc¿ dans l'échantillon. Dans une autre exécution, le PrP?Sc¿ et le PrP?C¿ sont amenés à réagir avec un anticorps marqué se fixant aux deux conformations, et avec une configuration qui ne se fixe qu'à la conformation liée à la maladie, la présence de la conformation liée à la maladie résultant de leur comparaison.

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