Construction and use of catalogued nucleic acid libraries...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C07B 61/00 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12N 1/00 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 11/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01)

Patent

CA 2330827

A process for constructing a catalogued nucleic acid library in which the proportional representation of the constituents is adjusted to advantage through the use of disclosed technologies for positive and negative selection. The resultant benefit is that significantly fewer library constituents will need to be screened in order to identify a potentially desired constituent. Moreover, library constituents that previously would have been essentially "lost" are now recoverable. Preferred embodiments of this invention include the cataloguing, normalization, and enrichment of library constituents. By way of example, but not limitation, this technology is serviceable for constructing a library that contains an adequate representation of desirable constituents that (1) are initially found in low-copy numbers within a sample source or (2) originate from an organism that is problematic to culture. Applicable uses of this invention include any library-screening endeavor previously hindered by logistical impediments. By expanding previous logistical frontiers this invention allows for a novel generation of previously unattainable molecules - particularly molecules that are "unclonable" from conventional, unadjusted libraries - to now be detected, cloned, manipulated, expressed, studied, and used. By disclosing the construction and screening of high yielding nucleic acid libraries from mixed and uncultivated organisms, the instant technology eclipses former boundaries in the area of biological discovery and enables the full breadth of biological diversity to be accessed in the search for previously undiscovered genes and gene products. The benefits of the present invention are seen to extend to areas of diagnosis, medicine, agriculture, manufacturing, and academia.

L'invention concerne un procédé de construction d'une bibliothèque cataloguée d'acides nucléiques, la représentation proportionnelle des constituants étant avantageusement ajustée au moyen de techniques de sélection positive ou négative. L'avantage résultant est caractérisé en ce que peu de constituants significatifs de bibliothèques ont besoin d'être analysés pour identifier un constituant potentiellement désiré. En outre, les constituants de bibliothèques qui antérieurement auraient été perdus, sont maintenant récupérés. Selon des modes préférés de réalisation, l'invention consiste à cataloguer, normaliser et enrichir les constituants d'une bibliothèque. A titre d'exemple, on utilise cette technique pour construire une bibliothèque contenant une représentation adéquate des constituants désirés qui (1) sont initialement trouvés en nombre limité de copies dans une source d'échantillon, ou (2) qui proviennent d'un organisme difficile à cultiver. Les utilisations de cette invention concernent n'importe quel dépistage de bibliothèque auparavant entravé par des obstacles logistiques. En élargissant les frontières logistiques antérieures, cette invention permet de détecter, de cloner, de manipuler, d'exprimer, d'étudier et d'utiliser une nouvelle génération de molécules qu'on ne pouvait produire auparavant - en particulier des molécules non clonables à partir de bibliothèques non ajustées, classiques. En présentant la construction et le dépistage de bibliothèques d'acides nucléiques à rendement élevé, à partir d'organismes mélangés non cultivés, la technique actuelle repousse les frontières du domaine de la découverte scientifique et permet d'accéder à une grande diversité biologique dans la recherche, en ce qui concerne les gènes et les produits géniques non découverts antérieurement. Cette invention s'étend aux domaines du diagnostic, de la médecine, de l'agriculture, de l'industrie et de la recherche.

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