C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/02 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01)
Patent
CA 2578138
An improved system for large scale production of a dimeric fusion protein consisting of the extracellular ligang-binding portion of the human (p75) tumor necrosis factor receptor (TNFR) linked to the Fc portion of IgGI in cell culture, particularly in media characterized by one or more of: i) a cumulative amino acid concentration greater than about 70 mM; ii) a molar cumulative glutamine to cumulative asparagine ratio of less than about 2; iii) a molar cumulative glutamine to cumulative total amino acid ratio of less than about 0.2; iv) a molar cumulative inorganic ion to cumulative total amino acid ratio between about 0.4 to 1; or v) a combined cumulative glutamine and cumulative asparagine concentration between about 16 and 36 mM, is provided. The use of such a system allows high levels of protein production and lessens accumulation of certain undesirable factors such as ammonium and/or lactate. Additionally, culture methods including a temperature shift, typically including a decrease in temperature when the culture has reached about 20-80% of it maximal cell density, are provided. Alternatively or additionally, the present invention provides methods such that, after reaching a peak, lactate and/or ammonium levels in the culture decrease over time.
La présente invention a trait à un système amélioré pour la production sur une grande échelle de protéines et/ou de polypeptides en culture cellulaire, notamment dans des milieux caractérisés par un ou plusieurs des éléments suivants: i) une concentration cumulative d'acides aminés supérieure à environ 70 mM; ii) un rapport glutamine cumulative molaire/asparagine cumulative inférieur à environ 2; iii) un rapport glutamine cumulative/total acides aminés cumulatif inférieur à 0,2; iv) un rapport ion inorganique cumulatif molaire/total acides aminés entre environ 0,4 et 1; ou v) une concentration combinée de glutamine cumulative et d'asparagine cumulative entre environ 16 et 36 mM. L'utilisation d'un tel système permet des niveaux élevés de production de protéines et réduit l'accumulation de certains facteurs indésirables tels que l'ammonium et/ou le lactate. La présente invention a également trait à des procédés de culture comprenant un décalage de la température, typiquement une baisse dans la température lorsque la culture a atteint environ 20-80 % de sa densité cellulaire maximale. En variante ou en outre, la présente invention a trait à des procédés tels, qu'après avoir atteint un pic, les niveaux d'ammonium et/ou de lactate dans la culture diminue dans le temps.
Drapeau Denis
Lasko Daniel
Luan Yen-Tung
Mercer James R.
Wang Wenge
Torys Llp
Wyeth Research Ireland Limited
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1522449