C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07H 1/08 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C12N 1/06 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2176496
Methods for extracting nucleic acids by heating sample cells at about 80-95 degrees C. in a permeabilization reagent containing a non-ionic detergent and metal chelating agent. The methods of the invention release large fragments of undegraded nucleic acids. without physically disrupting the entire cell wall. The nucleic adds are released into solution without bursting the cells and are suitable for research and testing without further purification. The extraction method described herein is rapid, easy to perform, and applicable to a wide variety of cells, including microorganisms. Clinical samples may be screened for the presence or absence of a microorganism by heating the sample at 80-95 degrees Celsius in the presence of a non-ionic detergent and a metal chelating agent, adding to the sample a nucleic acid probe specific to the selected microorganism, incubating the sample under conditions which allow the probe to hybridize to released nucleic acid and detecting whether any hybridized probe is present. A kit for performing the nucleic acid extraction methods disclosed herein is also described.
Procédés d'extraction d'acides nucléiques, consistant à chauffer des cellules échantillons à une température comprise entre 80 et 95 ~C, dans un réactif accroissant la perméabilité et contenant un détergent non ionique et un agent de chélation de métaux. Les procédés selon l'invention permettent de libérer des fragments importants d'acides nucléiques non dégradés sans rompre physiquement toute la paroi cellulaire. Les acides nucléiques sont libérés dans une solution sans faire éclater les cellules, et peuvent être utilisés pour la recherche et les essais sans purification supplémentaire. Le procédé d'extraction décrit ici est rapide, de réalisation facile et applicable à une grande variété de cellules, y compris des micro-organismes. Des échantillons cliniques peuvent être criblés afin de détecter la présence ou l'absence d'un micro-organisme, selon un procédé qui consiste à chauffer l'échantillon à une température comprise entre 80 et 95 ~C en présence d'un détergent non ionique et d'un agent de chélation de métaux, à ajouter à l'échantillon une sonde d'acide nucléique spécifique du micro-organisme choisi, à incuber l'échantillon dans des conditions permettant l'hybridation de la sonde à l'acide nucléique libéré, et à détecter la présence ou l'absence de toute sonde hybridée. Un kit permettant d'effectuer ces procédés d'extraction d'acide nucléique est également décrit.
Clark Kathleen A.
Kacian Daniel L.
Gen-Probe Incorporated
Smart & Biggar
LandOfFree
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