Method for detection of nucleic acid target sequences...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2319757

Disclosed is a method for detecting a nucleic acid target sequence of interest. The method involves the addition of probes complementary to regions of a double- stranded promoter, to form a complex comprising three strands of nucleic acid, such that a functional promoter may be formed within the complex suitable to receive a polymerase that recognizes the formed promoter. De novo synthesis via the polymerase from the formed promoter allows for the production and subsequent detection of a synthesized nucleic acid. Also disclosed is the complex formed in performance of the method, and a kit for performing the method.

La présente invention concerne un procédé servant à détecter la présence d'une séquence cible recherchée d'un acide nucléique, consistant d'abord à (a) ajouter des première et seconde sondes d'acide nucléique dans un échantillon comprenant la séquence recherchée, de manière à former un complexe comprenant trois brins d'acide nucléique. La première sonde comprend la séquence en pleine longueur d'un premier brin d'un promoteur à double brin, la séquence cible comprend une partie terminale d'un second brin du promoteur à double brin complémentaire d'une partie du premier brin, et la seconde sonde comprend le reste du second brin du promoteur à double brin complémentaire d'une partie du premier brin, de sorte qu'un promoteur fonctionnel soit formé lorsque la première sonde subit une hybridation avec à la fois la séquence cible et la seconde sonde, (b) ajouter ensuite une polymérase qui reconnaît le promoteur, afin d'induire la synthèse de novo d'acide nucléique à partir du promoteur contenu dans le complexe, et enfin, (c) détecter directement ou indirectement l'acide nucléique de novo synthétisé. Par ailleurs, cette invention concerne le complexe préparé selon cette invention ainsi qu'un nécessaire de réalisation du procédé susmentionné.

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