Methods and means for nucleic acid sequencing

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2515938

Nucleic acid sequencing-by-synthesis. Primed synthesis of a second strand complementary to a template strand in repeated sets of steps, each step comprising providing one or more of the possible nucleotide complementarity classes for incorporation into the synthesized strand, and each set of steps comprising providing all four possible nucleotide complementarity classes. Three of the four possible nucleotide complementarity classes may first be provided for incorporation into the synthesized strand, then separately the fourth nucleotide complementarity class alone. Also, a DNA molecule consisting of a stem portion and first and second loop portions, wherein the stem portion consists of a first strand and a second strand, wherein the first strand and second strand are equal in length, complementary and annealed together, wherein the first loop portion joins the 3' end of the first strand to the 5' end of the second strand and the second loop portion joins the 3' end of the second strand to the 5' end of the first strand so the DNA molecule has no free 5' or 3' ends, and uses thereof, especially in sequencing.

L'invention concerne la détermination de séquences nucléotidiques par séquençage. La synthèse amorcée d'un deuxième brin complémentaire d'un brin complémentaire dans des ensembles répétés d'étapes, chaque étape consistant à fournir une ou plusieurs des classes de complémentarité nucléotidiques à incorporer dans le brin synthétisé, et chaque ensemble d'étapes consistant é fournir les quatre classes complémentaires nucléotidiques possibles. Trois des quatre classes complémentaires nucléotidiques peuvent d'abord être fournies pour être incorporées dans le brin synthétisé, puis séparément la quatrième classe de complémentarité nucléotidique séparément. L'invention porte également sur une molécule d'ADN formée d'une partie tige et de première et seconde parties boucles, la partie tige comprenant un premier et un second brin, les premier et second brins étant de longueur équivalente, complémentaires et recuits ensemble, la première boucle reliant l'extrémité 3' du premier brin à l'extrémité 5' du second brin et la seconde boucle reliant l'extrémité 3' du second brin à l'extrémité 5' du premier brin, de sorte que la molécule d'ADN ne possède plus d'extrémité 5' ou 3' libre, et sur son utilisation.

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