C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01)
Patent
CA 2382483
The present invention provides libraries of fusion nucleic acids each comprising nucleic acid encoding a nucleic acid modification (NAM) enzyme, and nucleic acid encoding a candidate protein. Also provided is a library of fusion polypeptides comprising a nucleic acid modification (NAM) enzyme and a candidate protein. A library of expression vectors is provided each comprising (i) a fusion nucleic acid comprising a nucleic acid encoding a nucleic acid modification (NAM) enzyme, and nucleic acid encoding a candidate protein, and (ii) an EAS. At least two of the candidate proteins are different. Preferably, the NAM enzyme is a Rep protein. Also preferably, the EAS is greater than 20 nucleotides in length. Similarly, preferred embodiments utilize fusion nucleic acids comprising nucleic acids encoding presentation structures, nucleic acids encoding labels or nucleic acids encoding targeting sequences. The invention also provides libraries of nucleic acid/protein (NAP) conjugates each comprising a fusion polypeptide comprising a NAM enzyme and a candidate protein. The NAP conjugates also comprise an expression vector comprising a fusion nucleic acid comprising a fusion nucleic acid comprising a nucleic acid encoding a NAM enzyme, a nucleic acid encoding a candidate protein, and an enzyme attachment sequence (EAS) that is recognized by the NAM enzyme. The EAS and the NAM enzyme are covalently attached. Libraries of host cells and methods of screening are also provided.
L'invention concerne des bibliothèques d'acides nucléiques de fusion, chacune comprenant des acides nucléiques codant pour un enzyme de modification d'acide nucléique (NAM), et un acide nucléique codant pour une protéine candidate. L'invention concerne également une bibliothèque de polypeptides de fusion comprenant un enzyme de modification d'acide nucléique (NAM), et une protéine candidate, notamment une bibliothèque de vecteurs d'expression, chaque vecteur comprenant i) un acide nucléique de fusion renfermant un acide nucléique codant pour un enzyme de modification d'acide nucléique (NAM), et un acide nucléique codant pour une protéine candidate, et ii) une séquence de fixation d'enzyme (EAS). Il existe au moins deux protéines candidates différentes. L'enzyme NAM est, de préférence, une protéine Rep, et EAS est, de préférence, plus long que 20 nucléotides. De même, des modes de réalisation préférés utilisent des acides nucléiques de fusion comprenant des acides nucléiques codant pour des structures de présentation, des acides nucléiques codant pour des marqueurs, ou des acides nucléiques codant pour des séquences cibles. L'invention concerne également des bibliothèques de conjugués d'acide nucléique/protéine (NAP), chacun renfermant un polypeptide de fusion comprenant un enzyme NAM et une protéine candidate. Les conjugués NAP comprennent également un vecteur d'expression comprenant un acide nucléique de fusion renfermant un acide nucléique codant pour un enzyme NAM, un acide nucléique codant pour une protéine candidate, et une séquence de fixation d'enzyme (EAS) reconnue par l'enzyme NAM. Les enzymes EAS et NAM sont fixés de manière covalente. L'invention concerne enfin des bibliothèques de cellules hôtes et des procédés de criblage.
Johns Hopkins University School Of Medicine
Mbm Intellectual Property Law Llp
LandOfFree
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