C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01)
Patent
CA 2515586
The present invention provides products and methods for modulating expression of a target gene in a cell. One such method includes introducing into the cell a polynucleotide that forms a duplex region with an mRNA transcribed from said target gene, where the duplex region comprises a mammalian miRNA target region. Another such method includes introducing into the cell an siRNA that forms a duplex region with an miRNA, or precursor thereof, where an mRNA transcribed from the target gene comprises a miRNA target region. In certain preferred embodiments, the methods further include measuring expression of the target gene. The methods are particularly useful for modulating ontogenesis, function, differentiation and/or viability of a mammalian cell. As such, the invention also provides methods for controlling ontogenesis of mammal, function of mammalian cell, differentiation of mammalian cell or viability of mammalian cell in the post-transcriptional phase by introducing into the cell a miRNA or a siRNA silencing precursor to the miRNA. The invention additionally provides polynucleotides, including vectors, useful in the method of the instant invention. The provided polynucleotides include a plasmid vector comprising a promoter and a polynucleotide sequence expressing miRNA or precursor to the miRNA. Also included is a plasmid vector comprising a promoter and a nucleotide sequence expressing siRNA silencing precursor to miRNA. In certainpreferred embodiments, the miRNA is capable of forming a duplex region with an mRNA transcribed from a mammalian target gene.
Produits et méthodes permettant de moduler l'expression d'un gène cible dans une cellule. L'une de ces méthodes consiste à introduire dans la cellule un polynucléotide qui forme une région duplex avec un ARNm transcrit dudit gène cible, la région duplex comportant une région cible de microARN mammalien. Une autre méthode consiste à introduire dans la cellule un ARNsi qui forme une région duplex avec un microARN, ou un précurseur dudit microARN, un ARNm transcrit du gène cible comprenant une région cible de microARN. Dans certains modes de réalisation préférés, les méthodes consistent en outre à mesurer l'expression du gène cible. Lesdites méthodes sont particulièrement utiles pour moduler l'ontogenèse, la fonction, la différentiation et / ou la viabilité d'une cellule mammalienne. En tant que telle, la présente invention concerne également des méthodes de régulation de l'ontogenèse de mammifères, la fonction de cellules mammaliennes, la différentiation de cellules mammaliennes ou la viabilité de cellules mammaliennes dans la phase post-transcriptionnelle, par introduction dans la cellule d'un microARN ou d'un précurseur de silençage de type ARNsi du microARN. La présente invention concerne encore des polynucléotides, dont des vecteurs, utiles dans la méthode selon la présente invention. Les nucléotides décrits contiennent un vecteur plasmidique comportant un promoteur et une séquence polynucléotidique exprimant le microARN ou un précurseur dudit microARN. Elle concerne de surcroît un vecteur plasmidique comportant un promoteur et une séquence nucléotidique exprimant le précurseur de silençage de type ARNsi du microARN. Dans certains modes de réalisation préférés, le microARN est capable de former une région duplex avec un ARNm transcrit à partir d'un gène cible mammalien.
Kawasaki Hiroaki
Taira Kazunari
Bereskin & Parr
National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology
LandOfFree
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