C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2332619
There is provided a method of identifying DNA responsible for conferring a particular phenotype in a cell which method comprises a) constructing a cDNA or genomic library of the DNA of said cell in a suitable vector in an orientation relative to a promoter(s) capable of initiating transcription of said cDNA or DNA to double stranded (ds) RNA upon binding of an appropriate transcription factor to said promoter(s), b) introducing said library into one or more of said cells comprising said transcription factor, and c) identifying and isolating a particular phenotype of said cell comprising said library and identifying the DNA or cDNA fragment from said library responsible for conferring said phenotype. Using this technique it is also possible to assign function to a known DNA sequence by a) identifying a homologues) of said DNA sequence in a cell, b) isolating the relevant DNA homologue(s) or a fragment thereof from said cell, c) cloning said homologue or fragment thereof into an appropriate vector in an orientation relative to a suitable promoters) capable of initiating transcription of dsRNA from said DNA homologue or fragment upon binding of an appropriate transcription factor to said promoter(s) and d) introducing said vector into said cell from step a) comprising said transcription factor.
L'invention concerne un procédé pour identifier l'ADN qui confère un phénotype particulier dans une cellule. Le procédé consiste en ce qui suit: a) construire un ADNc ou une bibliothèque génomique de l'ADN de ladite cellule dans un vecteur convenable, avec une orientation par rapport à un (des) promoteur(s) qui permet d'initier la transcription dudit ADNc ou ADN vers un ARN double brin, après liaison d'un facteur de transcription approprié audit(s) promoteur(s); b) introduire cette bibliothèque dans une ou plusieurs cellules qui comprennent ce facteur de transcription et; c) identifier et isoler un phénotype particulier de ladite cellule qui comprend cette bibliothèque puis identifier le fragment d'ADN ou d'ADNc provenant de ladite bibliothèque et responsable d'avoir conféré le phénotype en question. Cette technique permet également d'assigner une fonction à une séquence d'ADN connue en a) identifiant un ou plusieurs homologues de ladite séquence d'ADN dans une cellule; b) isoler de ladite cellule le ou les homologue(s) d'ADN approprié(s) ou un de leurs fragments; c) cloner ledit homologue ou fragment d'homologue dans un vecteur approprié, avec une orientation par rapport à un (des) promoteur(s) qui permet d'initier la transcription dudit ADNc ou ADN vers un ARN double brin, après liaison d'un facteur de transcription approprié audit(s) promoteur(s) et d) introduire ce vecteur dans ladite cellule de l'étape a) qui comprend le facteur de transcription en question.
Bogaert Thierry
Mortier Katherine
Plaetinck Geert
Platteeuw Christ
Devgen N.v.
Smart & Biggar
LandOfFree
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