G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2485563
The aim of the invention is to create a method for analyzing complex peptide mixtures, in which the number of components that are to be analyzed is significantly reduced while losing only a small amount of information content. Said aim is achieved by targeted selection of the peptide fragments by means of coupling and decoupling reactions to a solid carrier and by fragmentation. Disclosed are different embodiments of the inventive method. In a first embodiment, use is made of the advantageous property of coupled N-terminal peptides to enable selective release of carrier material when pDITC is used as a linking agent while peptides that are coupled to upper amino acid sequences having NH2 functionality are not released. In a second embodiment, the N- terminals of peptides are blocked and then cracked, whereupon coupling to the solid carrier takes place, only peptides having a free N-terminal being immobilized while the blocked N-terminal peptides can be isolated by means of a washing process. The peptides are optionally marked. The mixture can then be analyzed by means of mass spectrometry or fluorescence spectroscopy. Peptides can also be immobilized on the solid carrier via the amine group following CNBr cleavage via homoserine lactone.
L'objectif de la présente invention est de concevoir un procédé d'analyse de mélanges peptidiques complexes, au cours duquel le nombre de composants à analyser est significativement réduit et seule une faible quantité d'informations est perdue. A cet effet, les fragments peptidiques sont soumis à une sélection ciblée faisant appel à des réactions de couplage et de découplage sur un support solide ainsi qu'à une fragmentation. Différents modes de réalisation de cette invention sont exposés. Le premier mode de réalisation est fondé sur la propriété avantageuse qu'ont les peptides N-terminaux couplés de se libérer sélectivement du matériau de support lorsque du pDITC est utilisé en tant que lieur, alors que des peptides couplés par l'intermédiaire de chaînes aminoacides à fonctionnalité NH¿2? ne sont pas libérés. Le deuxième mode de réalisation fait appel au blocage des N-terminaux de peptides qui sont ultérieurement soumis à une division. Ces peptides sont ensuite couplés avec le support solide, et seuls les peptides présentant un N-terminal libre sont immobilisés, tandis que les peptides dont le N-terminal est bloqué peuvent être isolés au moyen d'une étape de lavage. Le procédé comprend éventuellement une étape consistant à marquer les peptides. Le mélange peut ensuite être analysé au moyen d'une spectrométrie de masse ou d'une spectroscopie par fluorescence. Les peptides peuvent également être immobilisés sur le support solide par l'intermédiaire du groupe amine après l'étape de division, au moyen de CNBr par l'intermédiaire d'homosérine lactone.
Essmann Frank
Scheler Christian
Thies Sascha
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Proteome Factory Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1694359